Virusinės ligos atsirado senovėje, tačiau virologija kaip mokslas pradėjo vystytis XIX amžiaus pabaigoje.
1892 m. Rusų mokslininkas botanikas DI Ivanovsky, tyrinėdamas tabako lapų mozaikinę ligą, nustatė, kad šią ligą sukelia mažiausi mikroorganizmai, praeinantys per smulkiai išgręžtus bakterijų filtrus. Šie mikroorganizmai vadinami filtruojamais virusais (iš lotynų viruso - nuodai). Vėliau buvo įrodyta, kad yra ir kitų mikroorganizmų, praeinančių per bakterijų filtrus, todėl filtruoti virusai pradėti vadinti tiesiog virusais.
Susilpnėjusios šeimos, kurių ląstelėse yra daug negyvų lervų, gydomos antibiotikais. Nėra vaisto, kuris galėtų visiškai išgydyti virusines ligas. Tačiau sergantys vabzdžiai gydomi agentais, kurie padidina organizmo apsaugą ir riboja viruso vystymąsi.
Apsaugo nuo virusų dauginimosi ir skatina bičių vystymąsi pavasarį. Gydymas atliekamas ryte arba vakare, kai visos bitės yra avilyje. Biomicinas. Viruso susilpnėjusių vabzdžių kūne aktyviai vystosi patogeninė mikroflora. Todėl užsikrėtusioms šeimoms pirmoje vasaros pusėje rekomenduojama vartoti biomediciną. Sirupo dozė skiriama po 50 metų.
Didelį indėlį tiriant virusus įnešė sovietiniai virusologai: M.A.Morozovas, N.F.Gamaleya, L.A.Zilberis, M.P.Chumakovas, A.A.Smorodincevas, V.M.Ždanovas ir kiti.
Virusai yra neląstelinė forma gyvosios materijos egzistavimas. Jie yra labai maži. Pagal V. M. Ždanovo perkeltinę išraišką „jų dydį, palyginti su vidutinių bakterijų dydžiu, galima palyginti su pelės dydžiu dramblio atžvilgiu“. Virusus pamatyti pavyko tik išradus elektroninį mikroskopą.
Šiuos preparatus galima įsigyti kaip miltelius, kurie purškiami ant torto paviršiaus atitinkamai 5 g ir 2,5 g. Taip pat naudojami preparatai, turintys augalinių komponentų: česnako, juodųjų pipirų, asiūklio, pušies ekstrakto, jonažolės, purpurinės ežiuolės, eukalipto ir kt. Jie prisideda prie spartaus šeimų vystymosi, stiprina jų sveikatą ir gerina bičių imunitetą.
Didelis, įvairiaspalvis mikrokosmosas pasklinda aplink mus, tačiau niekada jo nematome plika akimi. Kiekvienas iš mūsų patyrė daugybę įvairių virusų atakų, pradedant bjauria migla. Beje, peršalimas gali sukelti daugiau nei 100 virusų rūšių - rinovirusus ir koronavirusus. Mažiau žinomas faktas yra tai, kad kiekvieno žmogaus kūnas formuojamas, o vėliau sunaikinamas naviko ląstelės... Laimei, daugumai žmonių imuninė sistema apsaugo nuo maliarijos. Tačiau virusai sutelkia dėmesį ne tik į žmones, bet ir į gyvūnus, augalus bei grybus.
Šiuo metu virusams tirti naudojama daugybė metodų: cheminių, fizikinių, molekulinių biologinių, imunobiologinių ir genetinių.
Visi virusai skirstomi į žmones, gyvūnus, vabzdžius, bakterijas ir augalus.
Virusai turi įvairiausių formų ir biologinių savybių, tačiau visi jie turi bendrų struktūrinių bruožų. Subrendusios viruso dalelės vadinamos virionais.
Tai trunka kelis dešimtmečius. Profesionaliai virusai apibūdinami kaip mikroskopinės baltymų dėžės, kuriose yra genetinės medžiagos. Baltymų kapsules supa nukleorūgščių grandinė. Tačiau, skirtingai nuo kitų mikrobų, virusai nėra nei mirę, nei gyvi. Tai sudaro ypatingą pasaulį, kuris yra riba tarp negyvų medžiagų ir gyvų organizmų. Profesionaliai virusai pažymimi kaip neaktyvūs - tai ženklas, kad jie nerodo jokių gyvybės ženklų, kol nepuola tinkamo šeimininko.
Jie gali būti visiškai išdžiovinti. Jų baltymų pakuotės bus transformuotos į panašios druskos kristalus, todėl sausomis sąlygomis jos tarnaus dešimtmečius. Tada jiems pakanka ištirpti vandenyje ir nedelsiant gyventi. Virusai patys negali net daugintis! Jie turi užpulti ir valdyti kitą langelį, kad galėtų juos paleisti. Į jį įterpiama nukleino rūgštis arba genetinė medžiaga.
Skirtingai nuo kitų mikroorganizmų, turinčių tiek DNR, tiek RNR, virione yra tik viena iš nukleorūgščių - arba DNR, arba RNR.
Virusų nukleorūgštis gali būti viengrandė ir dvigrandė. Beveik visų virusų, turinčių RNR, genome yra vienos grandinės RNR, o tų, kuriuose yra DNR, yra dvigubos grandinės. Pagal dviejų tipų genetinę medžiagą virusai skirstomi į turinčius RNR ir DNR. DNR turinčios šeimos apima 5 šeimas, RNR turinčios - 10 šeimų.
Kaip konkretų pavyzdį įdėkime rimą ir pažiūrėkime, ką girtas virusas daro mūsų uoslės organui. Infekcijai pakanka vieno mažyčio rinoviruso. Jis puola ląsteles ir taip randa tinkamą reprodukcijai aplinką. Užėjusi į kamerą ji privers padaryti kopijas. Dėl infekcijos gleivinės ląstelės gamina daugiau skysčių, o tai dirgina ir priverčia čiaudėti. Tada neįsivaizduojamas virusų skaičius išbarstomas į orą, kad rastų kitų aukų. Tačiau jūs negalite užkrėsti savo augintinio, pavyzdžiui, šuns ar katės.
* (Čia pateikiami duomenys tik apie kai kuriuos žmonėms patogeniškus virusus.)
Viriono struktūra... Viriono centre yra nukleino rūgštis, kurią supa kapsidas (iš graikų kanca - dėžutė). Kapsidą sudaro baltymų subvienetai, vadinami kapsomeromis. Subrendęs virusas yra cheminės struktūros nukleokapsidas. Kapsomerų skaičius ir jų supakavimo būdas (52 pav.) Yra griežtai pastovūs kiekvienos rūšies virusui. Pavyzdžiui, poliomielito viruse yra 32 kapsomerai, o adenovirusuose - 252 kapsomerai. Kapsomerai gali būti sukrauti daugiakampio pavidalu su vienodais simetriškais kraštais - kuboido formos (pavyzdžiui, adenovirusas). Gripo virusams būdingas sferinis stilius. Gali būti simetrijos rūšis, kai nukleorūgštis yra šaltinio formos, aplink kurią yra klojamos kapsomeros, tokiu atveju virusas turi lazdelės formą - virusą, kuris sukelia tabako lapų ligą.
Rhinovirusai, kaip ir kiti giminaičiai, dažniausiai puola tik vieno tipo šeimininkus, žmonėms - rimuoti. Virusai puola bakterijas! „Pavergtų“ ląstelių vaidmuo dažnai yra bakterijos. Daugelis žmonių negali atskirti viruso ir bakterijos. Primename, kad bakterijos, randamos skirtingose \u200b\u200baplinkose, yra patys mažiausi savarankiški gyvi organizmai - daugiausiai Žemėje. Idėja: vos viename arbatiniame šaukštelyje sodo dirvožemio jų telpa mažiausiai penki milijardai. Jei adatos gale kepėme bakterijas, kurios pažangiomis technologijomis buvo padidintos iki erdvėlaivio dydžio, išsiplėtusias bakterijas galėtume pamatyti plika akimi labai stengdamiesi.
Fagas turi sudėtingą simetrijos tipą: galva yra stačiakampio formos, o procesas yra lazdelės formos (spermos formos) (žr. 21, 22 pav.).
Taigi, atsižvelgiant į pakavimo būdą, virusai skirstomi į kuboidines, sferines, lazdelės formos ir spermatozoidines formas.
Be to, bakterijos tampa virusų atakų, ieškančių tinkamo šeimininko, taikiniu. T 4 lėtai nusileidžia ant bakterijų, kaip ir erdvėlaivis ant planetos paviršiaus. Iš karto po pasodinimo bakterijos suleidžia savo genus į bakterijos ląstelę. Genai iš tikrųjų yra cheminės instrukcijos, verčiančios bakterijas kurti naujus virusus.
Nauja karta gimsta per 20–30 minučių, o tada bakterijų ląstelių sienelė ištirpsta, o švieži virusai gali išeiti į apylinkes ieškoti naujų aukų. Beveik visų rūšių bakterijas parazituoja vienas ar keli virusai, vadinami bakteriofagais. Kai kurie iš jų nekenkia augalams, kiti yra lėtesni, kartais net grasina. Agresyvus virusų nešėjas tarp augalų yra daugybė mažų vabzdžių, ypač amarų. Erškėčiai maitina stiebą, o sultis sumuša galimi virusai. Tada kitas augalas gali pašalinti šiuos virusus iš savo virškinamojo trakto.
Kai kurie sudėtingesni virusai turi apvalkalą, vadinamą peplos. Jis susidaro virusui palikus ląstelę šeimininką. Šiuo atveju viruso kapsidą gaubia ląstelės-šeimininkės citoplazminės membranos vidinis paviršius ir susidaro vienas ar keli superkapsido apvalkalo sluoksniai. Tokį apvalkalą turi tik kai kurie virusai, pavyzdžiui, pasiutligės, herpeso, encefalito virusai. Šiame apvalkale yra fosfolipidų, kuriuos skaido eteris. Taigi, veikiant eteriui, galima atskirti virusą su peplosu nuo viruso, turinčio „nuogą kapsidą“.
Žinduolių ir paukščių infekcijas sukelia vadinamieji koronavirusai. Virusinė liga nėra išimtis. Infekcinė liga yra liga, kurią sukelia įvairūs mikroorganizmai, ypač bakterijos ir virusai. Jie gyvena žmogaus kūne arba ant jo, ir jiems patinka plisti iš vieno žmogaus į kitą. Daugelis užkrečiamos ligos nėra rimti, todėl netrukus bus rekomenduojama imuninė sistema. Deja, infekcijos yra daug pavojingesnės.
Priklausomai nuo to, kaip mes skiriame: vietinės infekcijos - ligos tik mažame plote. Kai liga išplinta dideliame plote, mes kalbame apie epidemiją. Blogiausia pandemija yra dažnis visame žemyne \u200b\u200bar pasaulyje. Jei liga yra virusinės kilmės, tuo sunkiau, kad, skirtingai nei bakterijos, ji negamina antibiotikų. Tai yra rimta liga, nes paprastai ja serga žmonės, kurie jau serga kita liga. Raudonukė paprastai nekenkia organizmui, tačiau gali pakenkti nėščių moterų vaisiui.
Kai kuriuose virusuose iš išorinio lipidinio sluoksnio sluoksnio kyšo erškėčių formos kapsomeros (šios erškėčiai yra bukai). Šie virusai vadinami peplomerais (pvz., Gripo virusas, žr. 52 pav.).
Viruso nukleorūgštis yra paveldimų savybių nešėja, o kapsidas ir išorinis apvalkalas atlieka apsaugines funkcijas, tarsi apsaugotų nukleorūgštį. Be to, jie palengvina viruso patekimą į ląstelę.
Paskirstymo metodai yra įvairūs. Miegas: jei jis sukelia hepatito B virusą, jis yra mirtinas. Marbury liga: filoviruso sukelta mirtis. Kaip mes dalinamės virusais? Kiekvienas virusas gali užkrėsti tam tikrą ląstelių diapazoną, kuris leidžia jam prisijungti prie specifinės molekulinės struktūros membranoje ar sienoje prie vadinamojo receptoriaus. Tam tikra molekulinė struktūra taip pat yra susijusi su virusu. Virusą gali užkrėsti tik ląstelės, turinčios tam tikrus receptorius.
Kiekvienas sveikas organizmas užsikrečia peršalimo virusine infekcija. Tai įmanoma imuninės sistemos dėka - asmeninio gydytojo. Šis virusas pirmiausia užvaldo mūsų asmeninį gydytoją - imuninę sistemą, dar vadinamą imunologine! Geros terapijos taisyklė yra užmušti gemalą puolant jo silpnybėms. Fermentai ir baltymai, susiję su viruso dauginimu, yra subtilūs ir gali būti sunaikinti chemikalaikurie sudaro šį vaistą.
Virusų dydžiai... Virusai matuojami nanometrais. Jų dydis svyruoja plačiame diapazone nuo 15-20 iki 350-400 nm.
Virusų matavimo metodai: 1) filtravimas per bakterijų filtrus, kurių porų dydis yra žinomas; 2) ultracentrifugavimas - dideli virusai nusėda greičiau; 3) virusų fotografavimas elektroniniu mikroskopu.
Pirmiausia blokuojame fermentą, būtiną virusui daugintis. Dalyvauja virusinis fermentas - atvirkštinė transkriptazė. Šis fermentas yra jautrus tinkamam vaistaiblokuoja jo veiklą. Vaistai, blokuojantys fermentą, reikalingą viruso dauginimuisi, - atvirkštinė transkriptazė, yra suskirstyti į dvi grupes.
Pirmasis yra nukleozidų analogai. Virusas naudoja viso preparato defekto imitacijas ir negali daugintis. Antroji vaistų grupė vadinama ne nukleozidų atvirkštinės transkriptazės inhibitoriais. Antra, mes blokuojame naujo viruso ar jo baltymų „kūno“ formavimąsi.
Cheminė virusų sudėtis... DNR ir RNR virusų kiekis ir kiekis nevienodi. DNR molekulinė masė svyruoja nuo 1 · 10 6 iki 1,6 · 10 8, o RNR - nuo 2 · 10 6 iki 9,0 · 10 6.
Baltymų virionuose yra nedaug, jie susideda iš 16-20 aminorūgščių. Be kapsidinių baltymų, yra ir vidinių baltymų, susijusių su nukleino rūgštimi. Baltymai lemia virusų antigenines savybes, taip pat dėl \u200b\u200btankios polipeptidinių grandinių pakuotės apsaugo virusą nuo ląstelių-šeimininkų fermentų poveikio.
Užtenka naudoti tam tikras chemines medžiagas, kad būtų išvengta jų plitimo. Taigi jis sustabdys viruso dauginimąsi žmonių sąskaita. Užregistruota daugybė vaistų, kurie veiksmingai naikina šį fermentą. Kūnas tampa neapsaugotas nuo mikrobų, kurie įprastomis sąlygomis nesukelia jokių ligos simptomų.
Pirmasis yra nukleozidų analogai. Virusas naudoja viso preparato defekto imitacijas ir negali daugintis. Antroji vaistų grupė vadinama ne nukleozidų atvirkštinės transkriptazės inhibitoriais. Antra, mes blokuojame naujo viruso ar jo baltymų „kūno“ formavimąsi.
Lipidai ir angliavandeniai yra išoriniame sudėtingų virionų apvalkale. Ląstelių-šeimininkų membrana yra lipidų ir angliavandenių šaltinis. Kai kuriuos virusus sudarantys polisacharidai lemia jų gebėjimą sukelti eritrocitų agliutinaciją.
Viruso fermentai... Virusai neturi savo metabolizmo, todėl jiems nereikia metabolinių fermentų. Tačiau nustatyta, kad kai kurie virusai turi fermentų, kurie palengvina jų įsiskverbimą į ląstelę-šeimininkę. Pavyzdžiui, gripo A viruse buvo rasta neuraminidazė, kuri atskaldo neuramininę rūgštį, esančią gyvūnų ląstelių membranose (eritrocituose ir kt.). Fagai turi lizocimą, kuris sunaikina ląstelės membraną, fosfatazę ir kt.
Virusinių antigenų nustatymas... Virusinius antigenus užkrėstose šeimininkų ląstelėse galima aptikti naudojant imunofluorescencijos metodus. Preparatai, turintys ląstelių užkrėstas virusuyra gydomi specifiniais imuniniais liuminescenciniais serumais. Žiūrint fluorescuojančiu mikroskopu, būdingas spindesys pastebimas tose vietose, kur kaupiasi viruso dalelės. Viruso tipą lemia specifinio liuminescencinio serumo, sukėlusio liuminescenciją, atitikimas.
Viruso įvedimas į ląstelę, jo sąveika su ląstele-šeimininke ir reprodukcija (reprodukcija) susideda iš eilės vienas po kito einančių etapų.
1 etapas. Prasideda adsorbcijos procesas viriono ir ląstelių receptorių sąskaita. Kompleksiniuose virionuose receptoriai yra ant voko paviršiaus kaip styloidinės ataugos (gripo virusas), paprastuose virionuose - ant kapsidės paviršiaus.
2 etapas. Skirtingų virusų virusas prasiskverbia į ląstelę-šeimininkę skirtingai. Pavyzdžiui, kai kurie fagai savo procesu perveria membraną ir injekuoja į šeimininko ląstelę nukleorūgštį (žr. 8 skyrių). Kiti virusai patenka į ląstelę patekę į viruso dalelę vakuolės pagalba, tai yra, įvedimo ląstelės membranoje vietoje susidaro depresija, tada jos kraštai užsidaro ir virusas patenka į ląstelę. Šis atitraukimas vadinamas viropexis.
3 etapas. „Viruso pašalinimas“ (suirimas). Savo reprodukcijai virusinė nukleorūgštis išlaisvinama iš ją saugančių baltymų dangalų (apvalkalo ir kapsidės). Nusirengimo procesas gali prasidėti adsorbcijos metu arba jis gali įvykti, kai virusas jau yra ląstelės viduje.
4 etapas. Šiame etape vyksta nukleorūgščių replikacija (reprodukcija) ir viruso baltymų sintezė. Šis etapas vyksta dalyvaujant ląstelės-šeimininkės DNR arba RNR.
5 etapas. Viriono surinkimas. Šį procesą palengvina pats baltymų dalelių susidarymas aplink viruso nukleino rūgštį. Baltymų sintezė gali prasidėti iškart po viruso nukleorūgščių sintezės arba po kelių minučių ar kelių valandų pertraukos. Kai kuriems virusams savaiminė jungtis vyksta citoplazmoje. Kiti branduolyje turi ląsteles-šeimininkes. Citoplazmoje visada susidaro išorinis apvalkalas (peplos).
6 etapas. Virionas išsiskiria iš ląstelės šeimininkės, per virusą perpilant per ląstelės membraną arba per skylę, susidariusią ląstelėje šeimininkėje (šiuo atveju ląstelė šeimininkė miršta).
Virusų ir ląstelių sąveikos tipai... Pirmasis tipas, produktyvi infekcija, būdinga naujų virionų susidarymui ląstelėje šeimininkėje.
Antrasis tipas - abortinė infekcija - nukleorūgščių replikacija nutrūksta.
Trečiajam tipui būdinga viruso nukleino rūgšties įtraukimas į ląstelės-šeimininkės DNR; yra viruso ir ląstelės-šeimininko sambūvio forma (virogenija). Šiuo atveju užtikrinamas virusų ir ląstelių DNR replikacijos sinchroniškumas. Faguose tai vadinama lizogenija.
Mikroskopinis tyrimas... Esant individualioms virusinėms infekcijoms, šeimininko ląstelių citoplazmoje arba branduoliuose pastebimi specifiniai tarpląsteliniai kūnai - inkliuzai, turintys diagnostinę vertę (pasiutligės atveju - Babesh-Negri kūnai, raupuose - Guarnieri kūnai ir kt.). Virusinių dalelių ir kūnų-inkliuzų dydžius galima dirbtinai padidinti taikant specialius preparatų su kandikliais ir impregnavimu apdorojimo metodus (pavyzdžiui, sidabro dengimo metodą pagal Morozovą) ir stebint panardinimo mikroskopu. Mažesni virionai, esantys už optinio mikroskopo matymo ribų, aptinkami tik elektronine mikroskopija. Ląstelių intarpų požiūrių yra įvairių. Kai kurie autoriai mano, kad jie yra virusų kolekcija. Kiti mano, kad jie atsiranda dėl ląstelės reakcijos į virusų patekimą.
Virusų genetika... Virusų modifikaciją (nepaveldimus pokyčius) lemia šeimininko ląstelės, kurioje virusas dauginasi, ypatybės. Modifikuoti virusai įgyja galimybę užkrėsti ląsteles, panašias į tas, kuriose jie buvo modifikuoti. Skirtingi virusai pasireiškia įvairiai. Pavyzdžiui, faguose keičiasi „neigiamų dėmių“ (fagų kolonijų) forma.
Mutacija - virusuose ji įvyksta veikiama tų pačių mutagenų, kurie sukelia bakterijų mutaciją (fiziniai ir cheminiai veiksniai). Nukleorūgščių replikacijos metu įvyksta mutacija. Mutacijos turi įtakos įvairioms virusų savybėms, pavyzdžiui, jautrumui temperatūrai ir kt.
Genetinė rekombinacija virusuose gali įvykti dėl to, kad ląstelė šeimininkė vienu metu užkrėsta dviem virusais, tuo tarpu atskirais genais galima apsikeisti dviem virusais ir susidaro rekombinantai, turintys dviejų tėvų genus.
Genetiškai vėl suaktyvėja genai, kai inaktyvuotas virusas kertamas su visišku, o tai veda prie inaktyvuoto viruso išgelbėjimo.
Spontaniška ir nukreipta virusų genetika turi didelę reikšmę vystantis infekciniam procesui.
Atsparus aplinkos veiksniams... Dauguma virusų yra inaktyvuojami veikiant aukšta temperatūra... Tačiau yra išimčių, pavyzdžiui, hepatito virusas atsparus karščiui.
Į žema temperatūra virusai nėra jautrūs, ultravioletiniai saulės spinduliai turi inaktyvuojantį poveikį virusams. Išsibarsčiusios saulės spinduliai juos veikia mažiau aktyviai. Virusai yra atsparūs gliceroliui, todėl juos galima ilgai laikyti glicerine. Jie atsparūs antibiotikams (auginant virusus tiriamoji medžiaga apdorojama antibiotikais, kad nuslopintų bakterijų florą).
Rūgštys, šarmai, dezinfekcijos priemonės inaktyvuoja virusus. Tačiau kai kurie virusai, inaktyvinti formalinu, išlaiko savo imunogenines savybes, o tai leidžia naudoti formaliną vakcinoms (pasiutligės vakcinai) gaminti.
Gyvūnų jautrumas... Kai kuriems virusams imlių gyvūnų spektras yra labai platus, pavyzdžiui, daugelis gyvūnų yra jautrūs pasiutligės virusams. Kai kurie virusai veikia tik vieną gyvūnų rūšį, pavyzdžiui, šunų maro virusas veikia tik šunis. Yra virusų, kuriems gyvūnai nėra imlūs - pavyzdžiui, tymų virusas ir kt.
Organotropija virusai... Virusai gali užkrėsti tam tikrus organus, audinius ir sistemas. Pavyzdžiui, pasiutligės virusas atakuoja nervų sistemą. Raupų \u200b\u200bvirusas yra dermatropinis ir kt.
Virusų patekimas į aplinką... Iš sergančio kūno virusai gali išsiskirti su išmatomis, pavyzdžiui, poliomielito virusu ir kitais enterovirusais. Pasiutligės virusas išsiskiria su seilėmis, gripo virusas išskiriamas iš nosiaryklės gleivinės ir kt.
Pagrindiniai virusų perdavimo būdai... Oro lašeliai (gripas, raupai), maistas (poliomielitas, hepatitas A), kontaktas su buitimi (pasiutligė), užkrečiamas (encefalitas).
Antivirusinis imunitetas... Žmogaus organizmas turi įgimtą atsparumą tam tikriems virusams. Pavyzdžiui, žmonės nėra jautrūs šunų maro virusui. Gyvūnai nėra imlūs tymų virusui. Šiais atvejais antivirusinis imunitetas pagrįstas ląstelių, galinčių palaikyti virusų dauginimąsi, nebuvimu.
Antivirusinį imunitetą lemia tiek ląstelių, tiek humoraliniai gynybos veiksniai, nespecifiniai ir specifiniai. Nespecifiniai veiksniai. Galingas viruso dauginimosi inhibitorius yra baltyminė medžiaga - interferonas. AT sveikas kūnas jo yra nedaug, o virusai prisideda prie interferono gamybos ir jo kiekis žymiai padidėja. Jis yra nespecifinis, nes blokuoja įvairių virusų dauginimąsi. Tačiau jis turi audinių specifiškumą, tai yra, skirtingų audinių ląstelės sudaro skirtingą interferoną. Manoma, kad jo veikimo mechanizmas slypi tame, kad jis trukdo ląstelių-šeimininkų baltymų sintezei ir taip sustabdo viruso dauginimąsi.
Specifiniai antivirusinio imuniteto veiksniai yra virusą neutralizuojantys antikūnai, hemagliutinuojantys ir nusodinantys.
Virusų auginimo metodai... Virusai dauginasi tik gyvybingose \u200b\u200bląstelėse. Jie auginami: vištienos embrionuose (53 pav.), Žmonių ir įvairių gyvūnų audinių kultūrose, jautrių gyvūnų, imlių nariuotakojų kūne.
Pirmuoju virusologijos vystymosi laikotarpiu pagrindinis virusų tyrimo metodas buvo dirbtinė gyvūnų infekcija, tačiau šis metodas yra sudėtingas, be to, gyvūnai buvo apsaugoti nuo daugelio virusų.
Didelę reikšmę plėtojant virusologiją turėjo virusų auginimo vištienos embrionuose ir žmogaus bei gyvūnų audinių ląstelių kultūroje metodų įvedimas.
Vištienos embriono infekcija... Virusams dauginti naudojami 7–12 dienų amžiaus vištienos embrionai, inkubuojami termostate 37 ° C temperatūroje. Būtina sąlyga tinkamam embriono vystymuisi yra tam tikros oro drėgmės laikymasis, kurį galima sukurti indą su vandeniu į termostatą.
Vištienos embriono tinkamumą infekcijai lemia embriono judesiai ir išplėtotas kraujagyslių tinklas ant choriono-alantoicinės membranos skenuojant ovoskopu.
Viščiukų embrionuose virusai auginami skirtingose \u200b\u200bužkrėstose embriono vietose (žr. 53 pav.):
1) ant choriono-alantoicinės membranos,
2) į alantoicinę ertmę;
3) į vaisiaus vandenų ertmę;
4) į trynio maišelį.
Vištienos embrionai užkrėsti dėžutėje naudojant sterilius instrumentus. Prieš užkrėtimą vištienos embrionai du kartus nuvalomi alkoholiu suvilgytu medvilniniu tamponu.
Infekcija ant choriono-alantoicinės membranos. Po dezinfekcijos kiaušiniai atsargiai nupjauna apvalkalo gabalą nuo buko galo, pašalinama lukšto membrana ir randama choriono-alantoicinė membrana. Infekcinė medžiaga 0,1–0,2 ml, naudojant švirkštą arba Pasteur pipetę, uždedama ant choriono-alantoicinės membranos. Po infekcijos skylė uždaroma dangteliu, o tarpas tarp jos ir viščiuko embriono užpildomas parafinu.
Kitoje kiaušinio pusėje pieštuku užrašykite infekcinės medžiagos pavadinimą ir užkrėtimo datą.
Infekcija į vaisiaus vandenų ertmę. Kiaušinis yra ovoskopuotas, o šoninėje pusėje parenkama vieta, kur chorionas-alantois neturi didelių kraujagyslių. Ši sritis pažymėta pieštuku. Kiaušinėliai dedami ant stovo horizontalioje padėtyje, dezinfekuojami ir specialia sterilia ietimi iki 213 mm gylio perveriama skylė lukšte, per kurią tuo pačiu atstumu tiesiai į vaisiaus vandenų ertmę įkišama adata su infekcine medžiaga. Kad įpurškiamas skystis nenutekėtų atgal, virš oro pagalvės padaroma punkcija, po kurios abi skylės užpildomos parafinu.
Infekcija į alantoic ertmę. Infekcija atliekama patamsintoje dėžutėje. Pažymima oro erdvė, apvalkalas virš oro erdvės dezinfekuojamas ir švirkšto adata su medžiaga įkišama per lukšto skylę link embriono. Jei adata pateko į alantoic ertmę, tada embriono šešėlis pasislinko. Po infekcijos skylė užpildoma parafinu.
Infekcija trynio maišelyje. Korpusas dezinfekuojamas. Kiaušinis dedamas ant stovo buku galu į dešinę taip, kad trynio maišelis būtų nukreiptas į viršų. Skylė pradurta virš oro kameros centre. Per lukšto skylę horizontalia kryptimi iki 2-3 mm gylio įkišama švirkšto adata, kuri patenka į trynio maišelį. Medžiaga įpurškiama 0,2–0,3 ml tūrio. Įvedus medžiagą, skylė vaškuojama.
Temperatūros režimas ir inkubacijos trukmė priklauso nuo įvesto viruso biologinių savybių.
Užkrėsti kiaušinėliai tikrinami kasdien - atliekant ovoskopiją, siekiant patikrinti embriono gyvybingumą. Jei embrionai miršta pirmą dieną, tai dažniausiai būna traumos infekcijos metu. Tokie kiaušiniai yra gauti iš patirties.
Jei reikia atskirai ištirti kiekvieną embriono komponentą, medžiaga surenkama tam tikra tvarka: išsiurbiamas alantoicinis skystis, tada perpjaunama vaisiaus vandenys, choriono-alantoicinė membrana, atskiriama vaisiaus vandenų membrana, embrionas, trynio maišelis ir tik po to pašalinama choriono-alantoicinė membrana, atskiriant ją nuo vidinės. apvalkalo paviršius. Viruso buvimą užkrėstame embrione lemia būdingi užkrėstos vištienos embriono choriono-alantoicinės membranos pokyčiai.
Virusai, neturintys hemagliutinuojančio aktyvumo, aptinkami naudojant CSC.
Virusui aptikti užkrėstų embrionų alanto arba amniono skysčiuose dedama RHA (hemagliutinaciją sukelia alanto arba amniono skysčiai arba suspensija, paruošta iš choriono-alantoicinės membranos).
Virusų kultivavimas ląstelių kultūroje... Virusams kauptis jautriose ląstelių kultūrose naudojami žmonių ir įvairių gyvūnų audiniai. Didžiausią praktinį pritaikymą gavo pirminių tripsinizuotų ir persodintų ląstelių linijų vieno sluoksnio kultūros.
Vieno sluoksnio ląstelių kultūros auginamos plokščio stiklo čiužinių induose. Ląstelių suspensija skystoje maistinėje terpėje 37 ° C temperatūroje leidžia gauti "in vitro" tam tikros histologinės struktūros ląstelių sluoksnį. Virusų buvimas audinių kultūrose nustatomas pakitus (degeneravus) ląsteles. Virusų tipas nustatomas neutralizuojant virusų poveikį, į vakcinuotą medžiagą pridedant atitinkamų tipų serumų.
Šie metodai leidžia greičiau įtraukti tyrimų rezultatus ir yra ekonomiškesni. Tais atvejais, kai virusai nesukelia citopatinio poveikio (degeneracijos) ir nesivysto viščiukų embrionuose, naudojami gyvūnų užkrėtimo metodai (žr. 11 skyrių).
Virusams auginti naudojamos nepertraukiamos ląstelės, kurios dažniau gaunamos iš piktybinių navikų ląstelių.
Vieno sluoksnio kultūros gaunamos iš žmogaus, vištienos, gyvūnų embrionų.
Vieno sluoksnio ląstelių kultūrų pranašumas yra technikos paprastumas ir apskaitos paprastumas.
Ląstelių gebėjimas daugintis už kūno ribų yra susijęs su audinių diferenciacijos laipsniu. Mažiau diferencijuoti audiniai turi didesnį gebėjimą daugintis (jungiamasis, epitelinis audinys).
Pirminių audinių kultūrų paruošimo metodų esmė yra tarpląstelinio audinio sunaikinimas ir ląstelių atskyrimas tolesniam monosluoksnio gamybai.
Ląstelių disociacija atliekama veikiant proteolitinių fermentų, dažniausiai tripsino, audinį. Tripsino tirpalas skatina ląstelių atsiskyrimą, išlaikant jų gebėjimą daugintis. Ląstelių kultūroms auginti reikalinga maistinė terpė. Terpės sudėtis yra sudėtinga, ji apima daugybę ingredientų: aminorūgštis, gliukozę, vitaminus, mineralines druskas, kofermentus ir kt. Audinių kultūra gaunama griežtai aseptinėmis sąlygomis. Antibiotikai (500 V penicilino ir 250 V streptomicino 1 ml) pridedami prie terpės, kad būtų slopinamas bakterinės floros augimas.
Paruoštas audinys supilamas su 0,25% pašildyto tripsino tirpalu ir inkubuojamas termostate 37 ° C temperatūroje. Inkubacijos metu audinys periodiškai maišomas sukant kolbą. Trypsinizuotos ląstelės centrifuguojamos 800-1000 aps./min. 5 minutes.
Tripsinizavimas ir centrifugavimas atliekamas labai atsargiai, kad nesužeistų ląstelių. Po centrifugavimo supernatantas pašalinamas ir ląstelių nuosėdos dedamos į nedidelį tūrį terpės. Norint gauti vienalytę masę, ląstelių suspensija filtruojama per vieną marlės sluoksnį piltuve (sterili). Ląstelių suspensijos sterilumas tikrinamas inokuliuojant 0,1 ml 2 mėgintuvėliuose su cukraus sultiniu.
Ląstelių kultivavimo sėkmė priklauso nuo inokuliacijos dozės, todėl po tripsinizavimo ląstelės skaičiuojamos Gorjajevo kameroje. Suskaičiavus, ląstelių suspensija praskiedžiama maistine terpe taip, kad 1 ml būtų 500 000–1 000 000 ląstelių ir supilama į mėgintuvėlius ir čiužinius. Audinių kultūros mėgintuvėliai inkubuojami inkubatoriuje pasvirusioje padėtyje.
Inokuluotos kultūros kasdien tiriamos mažo didinimo mikroskopu, siekiant nustatyti jų augimo pobūdį. Normaliai dauginančios ląstelės yra šviesios spalvos ir auga vienu sluoksniu. Jei ląstelės yra tamsios, grūdėtos ir nesidaugina, o tai gali būti užteršimo (netinkamo indų tvarkymo ar ingredientų užteršimo) rezultatas, tokios kultūros pašalinamos iš eksperimento.
Maistinės terpės pakeitimas praėjus 2-3 dienoms po sėjos pagerina proliferacijos intensyvumą.
Normalios, gerai dauginančios ląstelės yra užkrėstos tiriamąja medžiaga.
Persodintos kultūros daugiausia gaunamos iš piktybinių navikų. Helos padermė - moters, vardu Helena, gimdos kaklelio vėžio ląstelių kultūra (gauta 1950 m.); Hep-2 padermė išskirta iš paciento, sergančio gerklų vėžiu. Šių ląstelių augimas palaikomas laboratorijose atliekant nuoseklius pasažus. Jų ypatumas slypi tame, kad jie dauginasi ilgai. Šiuo metu šios ląstelės išgyveno tūkstančius kartų. Praejimo procese jie praranda kai kurias morfologines ir biochemines savybes - patiria mutacijas. Tačiau jie išlieka gana tinkami juose auginti virusus. Šių ląstelių kultūrą naudoja viso pasaulio laboratorijos.
Virusas dauginasi ląstelių kultūroje skirtingu laiku, priklausomai nuo viruso savybių ir ląstelių tipo.
Viruso buvimas sprendžiamas pagal citopatinį poveikį. Mikroskope stebima ląstelių degeneracija. Citopatinio veikimo laikas ir jo pobūdis priklauso nuo viruso dozės ir savybių.
Kai kuriems virusams citopatinis poveikis nustatomas po kelių dienų (raupų virusas), kitų - po 1-2 savaičių (hepatito virusas ir kt.).
Šiuo metu jau yra šimtai žmonių užkrėstų virusų. Kovoti prieš virusinės infekcijos atliekamas skirtingais metodais. Efektyviausia yra imunizacija. Tokiu būdu raupai buvo pašalinti, sumažėjo poliomielito atvejų. Kovojant su virusinėmis infekcijomis svarbi socialinė prevencija - benamių šunų naikinimas (kova su pasiutlige), asmeninė prevencija ir kt.
Tačiau šios priemonės negali užtikrinti visų pašalinimo virusinės ligos... Mokslininkai atkakliai ieško būdų, kaip būtų galima užkrėsti virusą, nepažeidžiant ląstelės, kurioje jis yra.
Todėl natūralu, kad Sovietų Sąjungos komunistų partijos programoje virusologija įvardijama kaip viena iš pirmaujančių gamtos mokslo šakų, kuri artimiausiais metais turėtų būti plėtojama prioritetiškai.
Pagrindiniai virusų tyrimo metodai... 1. Hemagliutinacijos reakcija, uždelstos hemagliutinacijos reakcija, netiesioginės hemagliutinacijos reakcija. Komplemento rišimosi reakcija.
2. Virusų neutralizavimo audinių kultūroje reakcija.
3. Imunofluorescencijos metodas.
4. Histologinis metodas - inkliuzų identifikavimas (maži Babesho kūnai - Negri - su pasiutlige; maži Pasheno kūnai - su raupais ir kt.).
5. Biologinis metodas.