Les virus. Interaction d'un virus avec une cellule

Les maladies virales sont apparues dans les temps anciens, mais la virologie en tant que science a commencé à se développer à la fin du 19ème siècle.

En 1892, le scientifique-botaniste russe DI Ivanovsky, étudiant la maladie de la mosaïque des feuilles de tabac, a découvert que cette maladie est causée par les plus petits micro-organismes qui passent à travers des filtres bactériens à pores fins. Ces micro-organismes sont appelés virus filtrables (du latin virus - poison). Plus tard, il a été montré qu'il y avait d'autres micro-organismes passant à travers des filtres bactériens, par conséquent, les virus filtrés ont commencé à être appelés simplement virus.

Les familles affaiblies, dans les cellules desquelles se trouvent de nombreuses larves mortes, sont traitées avec des antibiotiques. Il n'existe aucun médicament capable de guérir complètement les maladies virales. Cependant, les insectes malades sont traités avec des agents qui augmentent les défenses de l'organisme et limitent le développement du virus.

Empêche la réplication du virus et encourage les abeilles à se développer au printemps. Le traitement est effectué le matin ou le soir lorsque toutes les abeilles sont dans la ruche. Biomycine. Dans le corps des insectes affaibli par le virus, la microflore pathogène se développe activement. Par conséquent, il est recommandé d'utiliser la biomédecine pour les familles infectées dans la première moitié de l'été. Une dose de sirop est administrée après 50 ans.

Une grande contribution à l'étude des virus a été apportée par les virologues soviétiques: M.A.Morozov, N.F. Gamaleya, L.A. Zilber, M.P. Chumakov, A.A. Smorodintsev, V.M. Zhdanov et d'autres.

Les virus sont forme non cellulaire existence de matière vivante. Ils sont très petits. Selon l'expression figurative de VM Zhdanov, «leur taille par rapport à la taille moyenne des bactéries peut être comparée à la taille d'une souris par rapport à un éléphant». Il n'est devenu possible de voir des virus qu'après l'invention du microscope électronique.

Ces préparations sont disponibles sous forme de poudre, qui est pulvérisée sur la surface du gâteau en quantités de 5 g et 2,5 g, respectivement. On utilise également des préparations contenant des composants végétaux: ail, poivre noir, prêle, extrait de pin, millepertuis, échinacée violette, eucalyptus et autres. Ils contribuent au développement rapide des familles, renforcent leur santé et améliorent l'immunité des abeilles.

Un grand microcosme multicolore se répand tout autour de nous, mais on ne le voit jamais à l'œil nu. Chacun de nous a été la cible de nombreuses attaques dans divers virus, à commencer par une brume désagréable. À propos, le rhume peut causer plus de 100 types de virus - les rhinovirus et les coronavirus. Un fait moins connu est que le corps de chaque personne est formé puis détruit cellules tumorales... Heureusement, chez la plupart des gens, le système immunitaire prévient le paludisme. Cependant, les virus se concentrent non seulement sur les humains, mais également sur les animaux, les plantes et les champignons.

Actuellement, de nombreuses méthodes sont utilisées pour étudier les virus: chimiques, physiques, biologiques moléculaires, immunobiologiques et génétiques.

Tous les virus sont subdivisés en infectant les humains, les animaux, les insectes, les bactéries et les plantes.

Les virus ont une grande variété de formes et de propriétés biologiques, mais ils ont tous des caractéristiques structurelles communes. Les particules virales matures sont appelées virions.

Cela dure plusieurs décennies. Les virus sont professionnellement caractérisés comme des boîtes microscopiques de protéines contenant du matériel génétique. Une chaîne d'acide nucléique entoure les capsules protéiques. Cependant, contrairement aux autres microbes, les virus ne sont ni morts ni vivants. Il forme un monde spécial, qui est la frontière entre les substances inanimées et les organismes vivants. Professionnellement, les virus sont marqués comme inactifs - un signe qu'ils ne montrent aucun signe de vie jusqu'à ce qu'ils attaquent un hôte approprié.

Ils peuvent être complètement séchés. Leurs packs de protéines seront transformés en cristaux d'un sel similaire, de sorte qu'ils dureront des décennies dans des conditions sèches. Ensuite, il leur suffit de se dissoudre dans l'eau et de vivre immédiatement. Les virus en tant que tels ne peuvent même pas se reproduire! Ils doivent attaquer et contrôler une autre cellule pour les jouer. Il y insère de l'acide nucléique ou du matériel génétique.

Contrairement à d'autres micro-organismes contenant à la fois de l'ADN et de l'ARN, le virion ne contient qu'un seul des acides nucléiques - soit l'ADN ou l'ARN.

L'acide nucléique des virus peut être simple brin et double brin. Presque tous les virus contenant de l'ARN ont un ARN simple brin dans leur génome, et ceux contenant de l'ADN ont un ADN double brin. Conformément à deux types de substances génétiques, les virus sont divisés en ARN et ADN. Les familles contenant de l'ADN comprennent 5 familles, celles contenant de l'ARN - 10 familles.

À titre d'exemple concret, mettons une rime et voyons ce qu'un virus ivre fait à notre organe olfactif. Un petit rhinovirus suffit pour l'infection. Il attaque les cellules et trouve ainsi un environnement propice à la reproduction. Après être entrée dans la cellule, elle lui fera faire des copies. L'infection amène les cellules muqueuses à produire plus de liquide, ce qui est irritant et les fait éternuer. Ensuite, un nombre inimaginable de virus sont dispersés dans l'air pour trouver d'autres victimes. Cependant, vous ne pouvez pas infecter votre animal de compagnie, comme un chien ou un chat.

* (Voici des données sur quelques-uns seulement des virus pathogènes pour l'homme.)

Structure du virion... Au centre du virion se trouve un acide nucléique, qui est entouré d'une capside (du grec kanca - boîte). La capside est composée de sous-unités protéiques appelées capsomères. Un virus mature est une nucléocapside de structure chimique. Le nombre de capsomères et la manière dont ils sont conditionnés (Fig. 52) sont strictement constants pour chaque type de virus. Par exemple, le virus de la poliomyélite contient 32 capsomères, tandis que l'adénovirus contient 252 capsomères. Les capsomères peuvent être empilés sous la forme d'un polyèdre avec des bords symétriques uniformes - forme cuboïde (par exemple, adénovirus). Le style sphérique est typique des virus grippaux. Il peut y avoir un type de symétrie dans lequel l'acide nucléique a la forme d'un ressort autour duquel des capsomères sont déposés, auquel cas le virus a une forme en forme de bâtonnet - un virus qui provoque la maladie des feuilles du tabac.

Les rhinovirus, comme les autres parents, n'attaquent généralement qu'un seul type d'hôte; chez l'homme, la rime. Les virus attaquent les bactéries! Le rôle des cellules «asservies» est souvent celui des bactéries. Beaucoup de gens ne peuvent pas faire la différence entre un virus et une bactérie. Rappelez-vous que les bactéries que l'on trouve dans différents environnements sont les plus petits organismes vivants autosuffisants - les plus nombreux sur Terre. Pour une idée: une seule cuillère à café de terre de jardin en contient au moins cinq milliards. Si nous cuisions des bactéries au bout d'une aiguille, qui étaient ensuite agrandies avec une technologie de pointe à la taille d'un vaisseau spatial, nous pourrions voir les bactéries agrandies à l'œil nu avec un grand effort.


Le phage a un type complexe de symétrie: la tête est cuboïde et le processus est en forme de bâtonnet (en forme de sperme) (voir Fig. 21, 22).

Ainsi, selon la méthode d'emballage, les virus sont subdivisés en formes cuboïde, sphérique, en forme de bâtonnet et spermatozoïde.

De plus, les bactéries deviennent la cible d'attaques virales qui recherchent un hôte approprié. T 4 atterrit lentement sur des bactéries, tout comme un vaisseau spatial à la surface d'une planète. Immédiatement après la plantation, les bactéries injectent leurs gènes dans la cellule bactérienne. Les gènes sont en fait des instructions chimiques qui obligent les bactéries à créer de nouveaux virus.

Une nouvelle génération est née dans les 20 à 30 minutes, puis la paroi cellulaire bactérienne se dissout et des virus frais peuvent sortir dans les environs pour trouver de nouvelles victimes. Presque tous les types de bactéries sont parasités par un ou plusieurs virus appelés bactériophages. Certains d'entre eux ne nuisent pas aux plantes, d'autres sont plus lents, voire menaçants. De nombreux petits insectes, en particulier les pucerons, sont des vecteurs agressifs de virus entre les plantes. L'épine nourrit la tige et les jus sont battus par d'éventuels virus. Une autre plante peut alors éliminer ces virus de son tube digestif.

Certains virus, plus complexes, ont un shell appelé peplos. Il se forme lorsque le virus quitte la cellule hôte. Dans ce cas, la capside virale est enveloppée par la surface interne de la membrane cytoplasmique de la cellule hôte et une ou plusieurs couches de l'enveloppe de la supercapside sont formées. Seuls certains virus ont une telle enveloppe, par exemple les virus de la rage, de l'herpès, de l'encéphalite. Cette coquille contient des phospholipides, qui sont dégradés par l'éther. Ainsi, en agissant sur l'éther, il est possible de distinguer un virus à péplos d'un virus à "capside nue".

Les infections chez les mammifères et les oiseaux sont causées par les soi-disant coronavirus. Les maladies virales ne font pas exception. Une maladie infectieuse est une maladie causée par divers types de micro-organismes, en particulier des bactéries et des virus. Ils vivent à l'intérieur ou sur le corps humain et aiment se propager d'une personne à une autre. Beaucoup maladies infectieuses ne sont pas graves et le système immunitaire sera bientôt recommandé. Malheureusement, les infections sont beaucoup plus dangereuses.

Selon la façon dont nous distinguons: infections locales - maladies seulement dans une petite zone. Lorsqu'une maladie se propage sur une vaste zone, on parle d'épidémie. La pire pandémie est son incidence sur le continent ou dans le monde. Si la maladie est d'origine virale, le plus difficile est que, contrairement aux bactéries, elle ne produit pas d'antibiotiques. Il s'agit d'une maladie grave car elle touche généralement des personnes qui souffrent déjà d'une autre maladie. La rubéole ne nuit généralement pas au corps, mais elle peut endommager le fœtus chez la femme enceinte.

Dans certains virus, des capsomères sous forme d'épines (ces épines sont émoussées) dépassent de la couche lipidique externe de l'enveloppe. Ces virus sont appelés peplomers (p. Ex. Virus de la grippe, voir Figure 52).

L'acide nucléique du virus est porteur de propriétés héréditaires, et la capside et l'enveloppe externe ont des fonctions protectrices, comme pour protéger l'acide nucléique. De plus, ils facilitent l'entrée du virus dans la cellule.

Les méthodes de distribution sont variées. Sommeil: s'il provoque le virus de l'hépatite B, il est mortel. Maladie de Marbury: décès dû au filovirus. Comment partageons-nous les virus? Chaque virus peut infecter une gamme spécifique de cellules, ce qui lui permet de se lier à une structure moléculaire spécifique dans une membrane ou une paroi au niveau d'un soi-disant récepteur. Une structure moléculaire spécifique est également impliquée dans le virus. Le virus ne peut être infecté que par des cellules porteuses de certains récepteurs.

Chaque organisme sain s'infecte lui-même avec une infection par le virus du rhume. Ceci est possible grâce au système immunitaire - un médecin personnel. Ce virus domine principalement notre médecin personnel - le système immunitaire, également appelé immunologique! La règle d'une bonne thérapie est de tuer le germe en s'attaquant à ses faiblesses. Les enzymes et protéines impliquées dans la reproduction du virus sont délicates et peuvent être détruites produits chimiquesqui composent ce médicament.

Tailles de virus... Les virus sont mesurés en nanomètres. Leur taille fluctue dans une large gamme de 15-20 à 350-400 nm.

Méthodes de mesure des virus: 1) filtration à travers des filtres bactériens avec une taille de pore connue; 2) ultracentrifugation - les gros virus précipitent plus rapidement; 3) photographier des virus au microscope électronique.

Tout d'abord, nous bloquons l'enzyme nécessaire à la multiplication du virus. Une enzyme virale - la transcriptase inverse - est impliquée. Cette enzyme est sensible aux médicamentsbloquant son activité. Les médicaments qui bloquent l'enzyme nécessaire à la multiplication du virus - la transcriptase inverse, sont divisés en deux groupes.

Le premier concerne les analogues nucléosidiques. Le virus utilise des imitations du défaut complet contenu dans la préparation et ne peut pas se multiplier. Le deuxième groupe de médicaments est appelé inhibiteurs non nucléosidiques de la transcriptase inverse. Deuxièmement, nous bloquons la formation d'un «corps» d'un nouveau virus ou de ses protéines.

La composition chimique des virus... La quantité et le contenu des virus à ADN et à ARN ne sont pas les mêmes. Dans l'ADN, le poids moléculaire varie de 1 · 10 6 à 1,6 · 10 8, et dans l'ARN - de 2 · 10 6 à 9,0 · 10 6.

Les protéines des virions se trouvent en nombre insignifiant, elles se composent de 16 à 20 acides aminés. En plus des protéines de capside, il existe également des protéines internes associées à l'acide nucléique. Les protéines déterminent les propriétés antigéniques des virus et, en raison de l'empilement dense des chaînes polypeptidiques, protègent le virus de l'action des enzymes de la cellule hôte.

Il suffit d'utiliser certains produits chimiques pour empêcher leur prolifération. Ainsi, cela empêchera le virus de se multiplier au détriment des humains. De nombreux médicaments ont été enregistrés qui sont efficaces pour tuer cette enzyme. Le corps devient sans défense contre les germes, qui ne provoquent aucun symptôme de maladie dans des conditions normales.

Le premier concerne les analogues nucléosidiques. Le virus utilise des imitations du défaut complet contenu dans la préparation et ne peut pas se multiplier. Le deuxième groupe de médicaments est appelé inhibiteurs non nucléosidiques de la transcriptase inverse. Deuxièmement, nous bloquons la formation d'un «corps» d'un nouveau virus ou de ses protéines.

Les lipides et les glucides se trouvent dans l'enveloppe externe des virions complexes. La membrane de la cellule hôte est la source de lipides et de glucides. Les polysaccharides, qui font partie de certains virus, déterminent leur capacité à provoquer une agglutination des érythrocytes.

Enzymes virales... Les virus n'ont pas leur propre métabolisme, ils n'ont donc pas besoin d'enzymes métaboliques. Cependant, certains virus se sont avérés avoir des enzymes qui facilitent leur pénétration dans la cellule hôte. Par exemple, dans le virus de la grippe A, la neuraminidase a été trouvée, qui clive l'acide neuraminique contenu dans les membranes des cellules animales (érythrocytes, etc.). Les phages ont du lysozyme, qui détruit la membrane cellulaire, la phosphatase, etc.

Détection des antigènes viraux... Les antigènes viraux dans les cellules hôtes infectées peuvent être détectés en utilisant des techniques d'immunofluorescence. Préparations contenant des cellules virus infectésont traités avec des sérums immuns luminescents spécifiques. Lorsqu'il est observé sous un microscope à fluorescence, une lueur caractéristique est observée dans les endroits où les particules virales s'accumulent. Le type de virus est déterminé par la correspondance du sérum luminescent spécifique qui a provoqué la luminescence.

L'introduction du virus dans la cellule, son interaction avec la cellule hôte et la reproduction (reproduction) se composent d'une série d'étapes successives.

Étape 1. Commence par le processus d'adsorption aux dépens du virion et des récepteurs cellulaires. Dans les virions complexes, les récepteurs sont situés à la surface de l'enveloppe sous forme d'excroissances styloïdes (virus de la grippe), dans des virions simples, à la surface de la capside.

Étape 2. La pénétration du virus dans la cellule hôte se déroule différemment pour différents virus. Par exemple, certains phages percent la membrane avec leur processus et injectent de l'acide nucléique dans la cellule hôte (voir chapitre 8). D'autres virus pénètrent dans la cellule en attirant une particule virale à l'aide d'une vacuole, c'est-à-dire qu'une dépression se forme au site d'introduction dans la membrane cellulaire, puis ses bords se ferment et le virus pénètre dans la cellule. Cette rétraction est appelée viropexis.

Étape 3. «Décapage du virus» (désintégration). Pour sa reproduction, l'acide nucléique viral est libéré de ses enveloppes protéiques protectrices (enveloppe et capside). Le processus de déshabillage peut commencer pendant l'adsorption, ou il peut se produire lorsque le virus est déjà à l'intérieur de la cellule.

Stade 4. A ce stade, la réplication (reproduction) des acides nucléiques et la synthèse des protéines virales se produisent. Cette étape se produit avec la participation de l'ADN ou de l'ARN de la cellule hôte.

Étape 5. Assemblage du virion. Ce processus est facilité par l'auto-assemblage de particules protéiques autour de l'acide nucléique viral. La synthèse des protéines peut commencer immédiatement après la synthèse des acides nucléiques viraux, ou après un intervalle de plusieurs minutes ou plusieurs heures. Dans certains virus, l'auto-assemblage se produit dans le cytoplasme. D'autres ont des cellules hôtes dans le noyau. La formation de la coquille externe (peplos) se produit toujours dans le cytoplasme.

Stade 6. La libération du virion de la cellule hôte se produit par percolation du virus à travers la membrane cellulaire ou à travers un trou formé dans la cellule hôte (dans ce cas, la cellule hôte meurt).

Types d'interaction virus-cellule... Le premier type, l'infection productive, se caractérise par la formation de nouveaux virions dans la cellule hôte.

Le deuxième type - infection abortive - est que la réplication de l'acide nucléique est interrompue.

Le troisième type est caractérisé par l'incorporation d'acide nucléique viral dans l'ADN de la cellule hôte; il existe une forme de coexistence du virus et de la cellule hôte (virogénie). Dans ce cas, la synchronicité de la réplication de l'ADN viral et cellulaire est assurée. Dans les phages, cela s'appelle la lysogénie.

Examen microscopique... Avec les infections virales individuelles, des corps intracellulaires spécifiques sont observés dans le cytoplasme ou les noyaux des cellules de l'hôte - inclusions qui ont une valeur diagnostique (corps de Babesh-Negri en cas de rage, corps de Guarnieri dans la variole, etc.). Les tailles des particules virales et des corps-inclusions peuvent être artificiellement augmentées par des méthodes spéciales de traitement des préparations avec mordant et imprégnation (par exemple, la méthode d'argenture selon Morozov) et observées au microscope à immersion. Les virions plus petits qui se trouvent hors de la vue d'un microscope optique ne sont détectés que par microscopie électronique. Il existe différents points de vue concernant les inclusions intracellulaires. Certains auteurs pensent qu'ils représentent une collection de virus. D'autres pensent qu'ils résultent de la réaction de la cellule à l'introduction de virus.

Génétique des virus... La modification (changements non héréditaires) des virus est due aux caractéristiques de la cellule hôte dans laquelle le virus se reproduit. Les virus modifiés acquièrent la capacité d'infecter des cellules similaires à celles dans lesquelles ils ont été modifiés. Différents virus se manifestent de différentes manières. Par exemple, la forme des «points négatifs» (colonies de phages) change dans les phages.

Mutation - dans les virus, elle se produit sous l'influence des mêmes mutagènes qui provoquent une mutation chez les bactéries (facteurs physiques et chimiques). Une mutation se produit lors de la réplication de l'acide nucléique. Les mutations affectent diverses propriétés des virus, par exemple la sensibilité à la température, etc.

La recombinaison génétique dans les virus peut se produire à la suite d'une infection simultanée d'une cellule hôte avec deux virus, tandis que des gènes individuels peuvent être échangés entre deux virus et des recombinants sont formés contenant les gènes de deux parents.

La réactivation génétique des gènes se produit parfois lorsqu'un virus inactivé est croisé avec un virus complet, ce qui conduit au salut du virus inactivé.

La génétique spontanée et dirigée des virus est d'une grande importance dans le développement du processus infectieux.

Résistant aux facteurs environnementaux... La plupart des virus sont inactivés par l'action hautes températures... Cependant, il existe des exceptions, par exemple le virus de l'hépatite est résistant à la chaleur.

À basses températures les virus ne sont pas sensibles, les rayons ultraviolets du soleil ont un effet inactivant sur les virus. La lumière du soleil dispersée agit moins activement sur eux. Les virus sont résistants au glycérol, ce qui permet de les conserver longtemps dans la glycérine. Ils sont résistants aux antibiotiques (lors de la culture de virus, le matériel d'essai est traité avec des antibiotiques pour supprimer la flore bactérienne).

Les acides, les alcalis, les désinfectants inactivent les virus. Cependant, certains virus inactivés au formol conservent leurs propriétés immunogènes, ce qui permet d'utiliser le formol pour produire des vaccins (vaccin antirabique).

Susceptibilité des animaux... L'éventail des animaux sensibles à certains virus est très large, par exemple, de nombreux animaux sont sensibles aux virus de la rage. Certains virus n'affectent qu'une seule espèce animale, par exemple le virus de la peste canine n'affecte que les chiens. Il existe des virus auxquels les animaux ne sont pas sensibles - par exemple, le virus de la rougeole, etc.

Organotropie des virus... Les virus ont la capacité d'infecter certains organes, tissus et systèmes. Par exemple, le virus de la rage attaque le système nerveux. Le virus de la variole est dermatrope, etc.

Libération de virus dans l'environnement... À partir d'un corps malade, des virus peuvent être excrétés dans les matières fécales, par exemple le virus de la poliomyélite et d'autres entérovirus. Le virus de la rage est excrété dans la salive, le virus de la grippe est excrété par l'écoulement de la muqueuse nasopharyngée, etc.

Les principales voies de transmission des virus... Gouttelettes en suspension dans l'air (grippe, variole), nourriture (poliomyélite, hépatite A), contact et ménage (rage), transmissibles (encéphalite).

Immunité antivirale... Le corps humain a une résistance innée à certains virus. Par exemple, les humains ne sont pas sensibles au virus de la peste canine. Les animaux ne sont pas sensibles au virus de la rougeole. Dans ces cas, l'immunité antivirale repose sur l'absence de cellules capables de soutenir la reproduction des virus.

L'immunité antivirale est déterminée à la fois par des facteurs de défense cellulaires et humoraux, non spécifiques et spécifiques. Facteurs non spécifiques. Un puissant inhibiteur de la reproduction virale est une substance protéique - l'interféron. DANS corps sain il est contenu en petite quantité et les virus contribuent à la production d'interféron et sa quantité augmente considérablement. Il n'est pas spécifique car il bloque la reproduction de divers virus. Cependant, il a une spécificité tissulaire, c'est-à-dire que les cellules de différents tissus forment différents interférons. On pense que son mécanisme d'action réside dans le fait qu'il interfère avec la synthèse des protéines dans la cellule hôte et arrête ainsi la reproduction du virus.

Les facteurs spécifiques de l'immunité antivirale comprennent les anticorps neutralisant les virus, l'hémagglutination et la précipitation.

Méthodes de culture de virus... Les virus se reproduisent uniquement dans les cellules viables. Ils sont cultivés: dans des embryons de poulet (Fig.53), des cultures de tissus humains et divers animaux, dans le corps d'animaux sensibles, des arthropodes sensibles.

Dans la première période du développement de la virologie, la principale méthode d'étude des virus était l'infection artificielle des animaux, mais cette méthode est complexe et, en plus de cela, les animaux se sont révélés immunisés contre de nombreux virus.

L'introduction de méthodes pour la culture de virus dans des embryons de poulet et dans la culture de cellules de tissus humains et animaux a été d'une grande importance dans le développement de la virologie.

Infection d'embryons de poulet... Pour la reproduction des virus, des embryons de poulet âgés de 7 à 12 jours sont utilisés, incubés dans un thermostat à 37 ° C.Une condition nécessaire au bon développement de l'embryon est le respect d'une certaine humidité de l'air, qui peut être créée en plaçant un récipient contenant de l'eau dans le thermostat.

L'aptitude d'un embryon de poulet à l'infection est déterminée par la présence de mouvements de l'embryon et d'un réseau développé de vaisseaux sanguins sur la membrane chorion-allantoïque lors de la numérisation avec un ovoscope.

La culture de virus dans des embryons de poulet est effectuée à différents endroits de l'embryon, qui est infecté (voir Fig.53):

1) sur la membrane chorion-allantoïque,

2) dans la cavité allantoïdienne;

3) dans la cavité amniotique;

4) dans le sac vitellin.

Les embryons de poulet sont infectés dans une boîte à l'aide d'instruments stériles. Avant l'infection, les embryons de poulet sont essuyés deux fois avec un coton-tige imbibé d'alcool.

Infection de la membrane chorion-allantoïque. Après la désinfection, les œufs sont soigneusement coupés d'un morceau de coquille de l'extrémité émoussée, la membrane de la coquille est retirée et la membrane chorion-allantoïque est trouvée. Un matériau infectieux en une quantité de 0,1 à 0,2 ml à l'aide d'une seringue ou d'une pipette Pasteur est appliqué sur la membrane chorion-allantoïque. Après l'infection, le trou est fermé avec un capuchon et l'espace entre celui-ci et l'embryon de poulet est rempli de paraffine.

De l'autre côté de l'œuf, écrivez au crayon le nom du matériel infectieux et la date de l'infection.

Infection dans la cavité amniotique. L'œuf est ovoscopé et sur le côté latéral un site est sélectionné où le chorion-allantoïde est dépourvu de gros vaisseaux sanguins. Cette zone est marquée avec un crayon. Les œufs sont placés sur un support en position horizontale, désinfectés et un trou dans la coquille est percé d'une lance stérile spéciale à une profondeur de 213 mm, à travers laquelle une aiguille contenant du matériel infectieux est insérée à la même distance directement dans la cavité amniotique. Afin d'empêcher le liquide injecté de refluer, une perforation est pratiquée au-dessus du coussin gonflable, après quoi les deux trous sont remplis de paraffine.

Infection dans la cavité allantoïdienne. L'infection est réalisée dans une boîte sombre. L'espace d'air est noté, la coquille au-dessus de l'espace d'air est désinfectée et une aiguille de seringue avec le matériau est insérée à travers le trou dans la coquille vers l'embryon. Si l'aiguille pénètre dans la cavité allantoïdienne, l'ombre de l'embryon est déplacée. Après l'infection, le trou est rempli de paraffine.

Infection dans le sac vitellin. La coque est désinfectée. L'œuf est placé sur le support avec l'extrémité émoussée vers la droite afin que le sac vitellin soit tourné vers le haut. Un trou est percé au-dessus de la chambre à air au centre. À travers le trou dans la coquille dans une direction horizontale sur une profondeur de 2-3 mm, une aiguille de seringue est insérée, qui pénètre dans le sac vitellin. Le matériau est injecté dans un volume de 0,2 à 0,3 ml. Après l'introduction du matériau, le trou est ciré.

Le régime de température et la durée d'incubation dépendent des propriétés biologiques du virus introduit.

Les œufs infectés sont contrôlés quotidiennement - ovoscopie pour vérifier la viabilité de l'embryon. Si les embryons meurent le premier jour, la cause en est généralement un traumatisme lors de l'infection. Ces œufs sont issus de l'expérience.

S'il est nécessaire d'examiner séparément chaque composant de l'embryon, le matériel est collecté dans un certain ordre: le liquide allantoïque est aspiré, puis le liquide amniotique, la membrane chorion-allantoïque est coupée, la membrane amniotique, l'embryon, le sac vitellin sont séparés, et alors seulement la membrane chorion-allantoïque est retirée, en la séparant de l'intérieur la surface de la coque. La présence du virus dans l'embryon infecté est déterminée par les changements caractéristiques de la membrane chorion-allantoïque de l'embryon de poulet infecté.

Les virus qui n'ont pas d'activité hémagglutinante sont détectés à l'aide des CSC.

Pour détecter le virus dans les liquides allantoïdiens ou amniotiques des embryons infectés, un RHA est placé (l'hémagglutination est causée par des liquides allantoïdiens ou amniotiques ou une suspension préparée à partir de la membrane chorion-allantoïque).

Culture de virus en culture cellulaire... Pour l'accumulation de virus dans des cultures de cellules sensibles, des tissus humains et divers animaux sont utilisés. La plus grande application pratique a été reçue par des cultures monocouches de lignées cellulaires primaires-trypsinisées et continues.

Les cultures cellulaires monocouches sont cultivées dans des récipients à matelas plats en verre. La suspension cellulaire dans un milieu nutritif liquide à une température de 37 ° C permet d'obtenir une couche "in vitro" de cellules avec une structure histologique spécifique. La présence de virus dans les cultures de tissus est détectée par le changement (dégénérescence) des cellules. Le type de virus est déterminé en neutralisant l'effet des virus en ajoutant des sérums spécifiques de type appropriés au matériel vacciné.

Ces méthodes permettent une intégration plus rapide des résultats de la recherche et sont plus rentables. Dans les cas où les virus ne provoquent pas d'action cytopathique (dégénérescence) et ne se développent pas dans les embryons de poulet, des méthodes d'infection des animaux sont utilisées (voir chapitre 11).

Pour la culture de virus, des cellules continues sont utilisées, qui sont le plus souvent obtenues à partir de cellules de tumeurs malignes.

Les cultures monocouches sont obtenues à partir d'embryons humains, de poulet et d'animaux.

L'avantage des cultures cellulaires monocouche est la simplicité de la technique et la facilité de comptabilité.

La capacité des cellules à se reproduire à l'extérieur du corps est liée au degré de différenciation tissulaire. Les tissus moins différenciés ont une plus grande capacité à proliférer (tissu conjonctif, épithélial).

L'essence des méthodes de préparation des cultures de tissus primaires est la destruction du tissu intercellulaire et la séparation des cellules pour la production ultérieure d'une monocouche.

La dissociation des cellules est réalisée en agissant sur le tissu des enzymes protéolytiques, le plus souvent la trypsine. La solution de trypsine favorise la séparation des cellules tout en conservant leur capacité à se reproduire. La croissance des cultures cellulaires nécessite un milieu nutritif. La composition du milieu est complexe, il comprend un certain nombre d'ingrédients: acides aminés, glucose, vitamines, sels minéraux, coenzymes, etc. La culture tissulaire est obtenue dans des conditions strictement aseptiques. Des antibiotiques (500 U de pénicilline et 250 U de streptomycine dans 1 ml) sont ajoutés au milieu pour supprimer la croissance de la flore bactérienne.

Le tissu préparé est versé avec une solution à 0,25% de trypsine chauffée et incubé dans un thermostat à 37 ° C. Pendant l'incubation, le tissu est périodiquement agité en faisant tourner le ballon. Les cellules trypsinisées sont centrifugées à 800-1000 tr / min pendant 5 minutes.

La trypsinisation et la centrifugation sont effectuées très soigneusement pour ne pas blesser les cellules. Après centrifugation, le surnageant est éliminé et le sédiment cellulaire est placé dans un petit volume de milieu de culture. Pour obtenir une masse homogène, la suspension cellulaire est filtrée sur une couche de gaze dans un entonnoir (stérile). La stérilité de la suspension cellulaire est vérifiée en inoculant 0,1 ml dans 2 tubes avec du bouillon de sucre.

Le succès de la culture cellulaire dépend de la dose d'inoculation, par conséquent, après la trypsinisation, les cellules sont comptées dans la chambre de Goryaev. Après comptage, la suspension de cellules est diluée avec un milieu nutritif de telle sorte que 1 ml contienne 500 000-1 000 000 cellules et est versée dans des éprouvettes et des matelas. Les tubes de culture tissulaire sont incubés dans un incubateur en position inclinée.

Les cultures inoculées sont examinées quotidiennement sous un microscope à faible grossissement pour déterminer leurs modèles de croissance. Les cellules proliférantes normales sont de couleur claire et se développent en une seule couche. Si les cellules sont sombres, granuleuses et ne prolifèrent pas, ce qui peut être le résultat d'une contamination (mauvaise manipulation des plats ou contamination des ingrédients), alors ces cultures sont retirées de l'expérience.

Changer le milieu nutritif 2-3 jours après le semis améliore l'intensité de la prolifération.

Des cellules normales, bien proliférantes, sont infectées avec le matériel d'essai.

Les cultures transplantées sont principalement dérivées de tumeurs malignes. Souche Hela - culture de cellules cancéreuses cervicales d'une femme nommée Helena (obtenue en 1950); la souche Hep-2 a été isolée d'un patient atteint d'un cancer du larynx. La croissance de ces cellules est soutenue dans les laboratoires par des passages successifs. Leur particularité réside dans le fait qu'ils se reproduisent longtemps. À l'heure actuelle, ces cellules ont traversé des milliers de générations. Au cours du passage, ils perdent certaines propriétés morphologiques et biochimiques - ils subissent des mutations. Cependant, ils restent tout à fait adaptés à la culture de virus qu'ils contiennent. La culture de ces cellules est utilisée par des laboratoires du monde entier.

La reproduction du virus en culture cellulaire se produit à des moments différents, en fonction des propriétés du virus et du type de cellules.

La présence du virus est jugée par l'effet cytopathique. La dégénérescence cellulaire est observée au microscope. Le temps d'action cytopathique et sa nature dépendent de la dose et des propriétés du virus.

Dans certains virus, un effet cytopathique est détecté après quelques jours (virus de la variole), dans d'autres, après 1 à 2 semaines (virus de l'hépatite, etc.).

Actuellement, il existe déjà des centaines de virus connus pour infecter les humains. Se battre contre infections virales effectuée par différentes méthodes. La vaccination est la plus efficace. De cette manière, la variole a été éliminée et l'incidence de la poliomyélite a été réduite. La prévention sociale est importante dans la lutte contre les infections virales - la destruction des chiens errants (lutte contre la rage), la prévention personnelle, etc.

Cependant, ces mesures ne peuvent garantir l'élimination de tous maladies virales... Les scientifiques recherchent constamment des moyens d'infecter le virus sans endommager la cellule dans laquelle il se trouve.

Par conséquent, il est naturel que dans le programme du Parti communiste de l'Union soviétique, la virologie soit nommée l'une des principales branches des sciences naturelles, qui devrait recevoir un développement prioritaire dans les années à venir.

Méthodes de base de la recherche des virus... 1. Réaction d'hémagglutination, réaction d'hémagglutination retardée, réaction d'hémagglutination indirecte. Réaction de liaison du complément.

2. La réaction de neutralisation des virus en culture tissulaire.

3. Méthode d'immunofluorescence.

4. Méthode histologique - identification des inclusions (petits corps de Babesh - Negri - avec la rage; petits corps de Pashen - avec la variole, etc.).

5. Méthode biologique.