Viruși. Interacțiunea unui virus cu o celulă

Bolile virale au apărut în cele mai vechi timpuri, dar virologia ca știință a început să se dezvolte la sfârșitul secolului al XIX-lea.

În 1892, omul de știință-botanist rus DI Ivanovsky, studiind boala mozaicului din frunzele de tutun, a constatat că această boală este cauzată de cele mai mici microorganisme care trec prin filtrele bacteriene cu pori fini. Aceste microorganisme sunt numite virusuri filtrabile (din virusul latin - otravă). Mai târziu s-a arătat că există și alte microorganisme care trec prin filtrele bacteriene, prin urmare, virusurile filtrate au început să fie numite pur și simplu virusuri.

Familiile slăbite, în celulele cărora există multe larve moarte, sunt tratate cu antibiotice. Nu există medicamente care să vindece complet bolile virale. Cu toate acestea, insectele bolnave sunt tratate cu agenți care măresc apărarea organismului și limitează dezvoltarea virusului.

Previne replicarea virusului și încurajează albinele să se dezvolte primăvara. Tratamentul se efectuează dimineața sau seara când toate albinele sunt în stup. Biomicină. În corpul insectelor slăbit de virus, microflora patogenă se dezvoltă activ. Prin urmare, se recomandă utilizarea biomedicinei pentru familiile infectate în prima jumătate a verii. O doză de sirop se administrează după 50 de ani.

O mare contribuție la studiul virușilor a fost făcută de virologii sovietici: MA Morozov, N. F. Gamaleya, L. A. Zilber, M. P. Chumakov, A. A. Smorodintsev, V. M. Zhdanov și alții.

Virușii sunt formă necelulară existența materiei vii. Sunt foarte mici. Conform expresiei figurative a lui VM Zhdanov, „dimensiunea lor în raport cu dimensiunea bacteriilor medii poate fi comparată cu dimensiunea unui șoarece în raport cu un elefant”. A devenit posibil să se vadă viruși numai după inventarea microscopului electronic.

Aceste preparate sunt disponibile sub formă de pulbere, care se pulverizează pe suprafața tortului în cantități de 5 g și respectiv 2,5 g. De asemenea, sunt utilizate preparatele care conțin componente vegetale: usturoi, piper negru, coadă de cal, extract de pin, sunătoare, echinacee purpurie, eucalipt și altele. Acestea contribuie la dezvoltarea rapidă a familiilor, consolidându-le sănătatea și îmbunătățind imunitatea albinelor.

Un microcosmos mare, multicolor, se răspândește în jurul nostru, dar nu îl vedem niciodată cu ochiul liber. Fiecare dintre noi a fost ținta multor atacuri împotriva diferiților viruși, începând cu o ceață urâtă. Apropo, răcelile pot provoca peste 100 de tipuri de virusuri - rinovirusuri și coronavirusuri. Un fapt mai puțin cunoscut este că corpul fiecărei persoane este format și apoi distrus celulele tumorale... Din fericire, la majoritatea oamenilor, sistemul imunitar previne malaria. Cu toate acestea, virușii se concentrează nu numai pe oameni, ci și pe animale, plante și ciuperci.

În prezent, multe metode sunt utilizate pentru a studia virusurile: chimice, fizice, moleculare biologice, imunobiologice și genetice.

Toate virusurile sunt împărțite în oameni care infectează, animale, insecte, bacterii și plante.

Virușii au o mare varietate de forme și proprietăți biologice, dar toate au trăsături structurale comune. Particulele de virus mature se numesc virioni.

Durează câteva decenii. Virușii sunt caracterizați profesional ca niște cutii microscopice de proteine \u200b\u200bcare conțin material genetic. Un lanț de acid nucleic înconjoară capsulele proteice. Cu toate acestea, spre deosebire de alți microbi, virușii nu sunt nici morți, nici vii. Formează o lume specială, care este granița dintre substanțele neînsuflețite și organismele vii. Profesional, virușii sunt marcați inactivi - semn că nu prezintă semne de viață până când nu atacă o gazdă adecvată.

Se pot usca complet. Pachetele lor de proteine \u200b\u200bvor fi transformate în cristale de sare similară, așa că vor rezista zeci de ani în condiții uscate. Atunci este suficient ca ei să se dizolve în apă și să trăiască imediat. Virușii ca atare nici măcar nu se pot reproduce! Ei trebuie să atace și să controleze o altă celulă pentru a le juca. Se introduce acid nucleic sau material genetic în el.

Spre deosebire de alte microorganisme care conțin atât ADN, cât și ARN, virionul conține doar unul dintre acizii nucleici - fie ADN, fie ARN.

Acidul nucleic al virușilor poate fi monocatenar și bicatenar. Aproape toți virusii care conțin ARN au ARN monocatenar în genomul lor, iar cei care conțin ADN au ADN bicatenar. În conformitate cu două tipuri de substanță genetică, virușii sunt împărțiți în ARN și ADN. Familiile care conțin ADN includ 5 familii, cele care conțin ARN - 10 familii.

Ca un exemplu concret, să punem o rimă și să vedem ce face un virus bețiv organului nostru olfactiv. Un mic rinovirus este suficient pentru infecție. Atacă celulele și astfel găsește un mediu adecvat pentru reproducere. După ce intră în celulă, o va face să facă copii. Infecția determină celulele mucoase să producă mai mult fluid, care este iritant și le face să strănută. Apoi, un număr inimaginabil de viruși sunt împrăștiați în aer pentru a găsi alte victime. Cu toate acestea, nu vă puteți infecta animalul de companie, cum ar fi un câine sau o pisică.

* (Iată date despre unele dintre virusurile patogene pentru oameni.)

Structura virionului... În centrul virionului există un acid nucleic, care este înconjurat de o capsidă (din greaca kanca - cutie). Capsidul este alcătuit din subunități proteice numite capsomere. Un virus matur este o nucleocapsidă în structura chimică. Numărul capsomerilor și modul în care sunt ambalate (Fig. 52) sunt strict constante pentru fiecare tip de virus. De exemplu, virusul poliomielitei conține 32 capsomere, în timp ce adenovirusul conține 252 capsomere. Capsomerii pot fi stivuite sub forma unui poliedru cu margini uniforme simetrice - formă cuboidală (de exemplu, adenovirus). Stilul sferic este tipic pentru virusurile gripale. Poate exista un tip de simetrie în care acidul nucleic are forma unui izvor în jurul căruia sunt așezate capsomere, caz în care virusul are o formă în formă de tijă - un virus care provoacă boala frunzelor de tutun.

Rinovirusurile, ca și alte rude, atacă de obicei un singur tip de gazdă; la om, rimează. Virușii atacă bacteriile! Rolul celulelor „înrobite” este deseori bacteriile. Mulți oameni nu pot face diferența dintre un virus și o bacterie. Amintiți-vă că bacteriile care se găsesc în medii diferite sunt cele mai mici organisme vii autosuficiente - cele mai numeroase de pe Pământ. Pentru o idee: doar o linguriță de pământ de grădină conține cel puțin cinci miliarde dintre ele. Dacă am coace bacteriile la vârful unui ac, care au fost apoi mărite cu tehnologie avansată la dimensiunea unei nave spațiale, am putea vedea bacteriile mărite cu ochiul liber cu mare efort.


Fagul are un tip complex de simetrie: capul este cuboidal, iar procesul este în formă de tijă (în formă de spermă) (vezi Fig. 21, 22).

Astfel, în funcție de metoda de ambalare, virușii sunt împărțiți în forme cuboidale, sferice, în formă de tijă și spermatozoizi.

În plus, bacteriile devin ținta atacurilor virale în căutarea unei gazde potrivite. T 4 aterizează încet pe bacterii, la fel ca o navă spațială pe suprafața unei planete. Imediat după plantare, bacteriile își injectează genele în celula bacteriană. Genele sunt de fapt instrucțiuni chimice care forțează bacteriile să creeze noi viruși.

O nouă generație se naște în 20-30 de minute, iar apoi peretele celular bacterian se dizolvă, iar virușii proaspeți pot ieși în vecinătate pentru a găsi noi victime. Aproape fiecare tip de bacterie este parazitat de unul sau mai mulți virusuri numiți bacteriofagi. Unele dintre ele nu dăunează plantelor, altele sunt mai lente, uneori chiar amenințătoare. Multe insecte mici, în special afide, sunt purtători agresivi de viruși între plante. Spinul hrănește tulpina, iar sucurile sunt bătute de posibili viruși. O altă plantă poate apoi să elimine aceste virusuri din tractul digestiv.

Unele viruși, care sunt mai complexe, au o coajă numită peplos. Se formează atunci când virusul părăsește celula gazdă. În acest caz, capsida virală este învelită de suprafața interioară a membranei citoplasmatice a celulei gazdă și se formează unul sau mai multe straturi ale anvelopei supercapsidelor. Doar unii viruși au un astfel de plic, de exemplu, virusurile rabiei, herpesului, encefalitei. Această coajă conține fosfolipide, care sunt degradate de eter. Astfel, acționând asupra eterului, este posibil să se distingă un virus cu peplos de un virus cu „capsidă goală”.

Infecțiile la mamifere și păsări sunt cauzate de așa-numitele coronavirusuri. Boala virală nu face excepție. O boală infecțioasă este o boală cauzată de diferite tipuri de microorganisme, în special bacterii și viruși. Locuiesc în interiorul sau pe corpul uman și le place să se răspândească de la o persoană la alta. Mulți boli infecțioase nu sunt grave și sistemul imunitar va fi recomandat în curând. Din păcate, infecțiile sunt mult mai periculoase.

În funcție de modul în care distingem: infecții locale - boli numai într-o zonă mică. Când o boală se răspândește pe o suprafață extinsă, vorbim despre o epidemie. Cea mai gravă pandemie este incidența pe continent sau în lume. Dacă boala este de origine virală, cu atât mai dificil este că, spre deosebire de bacterii, nu produce antibiotice. Aceasta este o boală gravă, deoarece afectează de obicei persoanele care suferă deja de o altă boală. Rubeola de obicei nu dăunează corpului, dar poate afecta fătul la femeile gravide.

În unele viruși, capsomerii sub formă de spini (acești spini sunt contondenți) ies din stratul lipidic exterior al plicului. Astfel de viruși sunt numiți peplomeri (de exemplu, virusul gripal, a se vedea Figura 52).

Acidul nucleic al virusului este purtător de proprietăți ereditare, iar capsida și învelișul exterior au funcții de protecție, ca și cum ar proteja acidul nucleic. În plus, acestea facilitează intrarea virusului în celulă.

Metodele de distribuție sunt variate. Somn: Dacă provoacă virusul hepatitei B, este fatal. Boala Marbury: moarte cauzată de filovirus. Cum împărtășim viruși? Fiecare virus poate infecta o gamă specifică de celule, ceea ce îi permite să se lege de o structură moleculară specifică dintr-o membrană sau perete la așa-numitul receptor. O structură moleculară specifică este, de asemenea, implicată în virus. Virusul poate fi infectat numai de celule care transportă anumiți receptori.

Fiecare organism sănătos se infectează cu o infecție cu virusul rece. Acest lucru este posibil datorită sistemului imunitar - un medic personal. Acest virus depășește în primul rând medicul nostru personal - sistemul imunitar, numit și imunologic! Regula unei bune terapii este uciderea germenilor prin atacarea punctelor slabe ale acestuia. Enzimele și proteinele implicate în reproducerea virusului sunt delicate și pot fi distruse produse chimicecare alcătuiesc acest medicament.

Dimensiunile virușilor... Virușii sunt măsurați în nanometri. Magnitudinea lor fluctuează într-o gamă largă de la 15-20 la 350-400 nm.

Metode de măsurare a virusului: 1) filtrare prin filtre bacteriene cu o dimensiune a porilor cunoscută; 2) ultracentrifugare - virusurile mari precipită mai repede; 3) fotografierea virușilor la microscopul electronic.

În primul rând, blocăm enzima necesară înmulțirii virusului. Este implicată o enzimă virală - transcriptaza inversă. Această enzimă este sensibilă la adecvată medicamenteblocându-i activitatea. Medicamentele care blochează enzima necesară înmulțirii virusului - transcriptaza inversă, sunt împărțite în două grupuri.

Primul este analogii nucleozidici. Virusul folosește imitații ale defectului complet conținut în preparat și nu se poate înmulți. Al doilea grup de medicamente se numește inhibitori non-nucleozidici ai revers transcriptazei. În al doilea rând, blocăm formarea „corpului” noului virus sau a proteinelor acestuia.

Compoziția chimică a virușilor... Cantitatea și conținutul virusurilor ADN și ARN nu sunt aceleași. În ADN, greutatea moleculară variază de la 1 · 10 6 la 1,6 · 10 8, iar în ARN - de la 2 · 10 6 la 9,0 · 10 6.

Proteinele din virioni se găsesc într-un număr nesemnificativ, acestea constând din 16-20 aminoacizi. În plus față de proteinele capsidei, există și proteine \u200b\u200binterne asociate cu acidul nucleic. Proteinele determină proprietățile antigenice ale virușilor și, de asemenea, datorită împachetării dense a lanțurilor polipeptidice, protejează virusul de acțiunea enzimelor celulei gazdă.

Este suficient să folosiți anumite substanțe chimice pentru a preveni proliferarea lor. Astfel, va opri multiplicarea virusului în detrimentul oamenilor. Au fost înregistrate multe medicamente care sunt eficiente în distrugerea acestei enzime. Corpul devine lipsit de apărare împotriva germenilor, care nu cauzează niciun simptom al bolii în condiții normale.

Primul este analogii nucleozidici. Virusul folosește imitații ale defectului complet conținut în preparat și nu se poate înmulți. Al doilea grup de medicamente se numește inhibitori non-nucleozidici ai revers transcriptazei. În al doilea rând, blocăm formarea „corpului” noului virus sau a proteinelor acestuia.

Lipidele și carbohidrații se găsesc în învelișul exterior al virionilor complexi. Membrana celulei gazdă este sursa de lipide și carbohidrați. Polizaharidele, care fac parte din unele virusuri, determină capacitatea lor de a provoca aglutinarea eritrocitelor.

Enzime virale... Virușii nu au propriul lor metabolism, deci nu au nevoie de enzime metabolice. Cu toate acestea, s-a constatat că unii viruși au enzime care facilitează penetrarea lor în celula gazdă. De exemplu, în virusul gripal A s-a găsit neuraminidază, care scinde acidul neuraminic conținut în membranele celulelor animale (eritrocite etc.). Fagii au lizozimă, care distruge membrana celulară, fosfataza etc.

Detectarea antigenelor virale... Antigenele virale din celulele gazdă infectate pot fi detectate folosind tehnici de imunofluorescență. Preparate care conțin celule virus infectatsunt tratate cu seruri luminoase imune specifice. Când este privit la microscop fluorescent, se observă o strălucire caracteristică în locurile în care se acumulează particule virale. Tipul de virus este determinat de corespondența serului luminescent specific care a provocat luminescența.

Introducerea virusului în celulă, interacțiunea sa cu celula gazdă și reproducere (reproducerea) sunt compuse dintr-o serie de etape succesive.

Etapa 1. Începe cu procesul de adsorbție în detrimentul receptorilor virionali și celulari. La virioni complexi, receptorii sunt localizați pe suprafața membranei sub formă de excrescențe stiloide (virusul gripal), în virioni simpli, pe suprafața capsidei.

Etapa 2. Penetrarea virusului în celula gazdă are loc diferit pentru diferiți viruși. De exemplu, unii fagi străpung membrana cu procesul lor și injectează acid nucleic în celula gazdă (vezi Capitolul 8). Alți viruși intră în celulă atrăgând o particulă virală cu ajutorul unui vacuol, adică se formează o depresiune la locul de penetrare în membrana celulară, apoi marginile sale sunt închise și virusul apare în celulă. Această retragere se numește viropexis.

Etapa 3. „Dezactivarea virusului” (dezintegrare). Pentru reproducerea sa, acidul nucleic viral este eliberat de învelișurile proteice (plic și capsidă) care îl protejează. Procesul de dezbrăcare poate începe în timpul adsorbției sau poate apărea atunci când virusul este deja în interiorul celulei.

Etapa 4. În acest stadiu apare replicarea (reproducerea) acizilor nucleici și sinteza proteinelor virale. Această etapă are loc cu participarea ADN-ului sau ARN-ului celulei gazdă.

Etapa 5. Asamblarea virionului. Acest proces este facilitat de auto-asamblarea particulelor de proteine \u200b\u200bîn jurul acidului nucleic viral. Sinteza proteinelor poate începe imediat după sinteza acidului nucleic viral sau după un interval de câteva minute sau câteva ore. La unele virusuri, auto-asamblarea are loc în citoplasmă. Alții au celule gazdă în nucleu. Formarea învelișului exterior (peplos) are loc întotdeauna în citoplasmă.

Etapa 6. Eliberarea virionului din celula gazdă are loc prin percolarea virusului prin membrana celulară sau printr-o gaură formată în celula gazdă (în acest caz, celula gazdă moare).

Tipuri de interacțiune virus-celulă... Primul tip, infecția productivă, se caracterizează prin formarea de noi virioni în celula gazdă.

Al doilea tip - infecția abortivă - este că replicarea acidului nucleic este întreruptă.

Al treilea tip se caracterizează prin încorporarea acidului nucleic viral în ADN-ul celulei gazdă; există o formă de coexistență a virusului și a celulei gazdă (virogenie). În acest caz, se asigură sincronicitatea replicării ADN-ului viral și celular. La fagi, aceasta se numește lizogenie.

Examinare microscopica... În cazul infecțiilor virale individuale, se observă corpuri intracelulare specifice în citoplasmă sau nuclee ale celulelor gazdei - incluziuni care au valoare diagnostic (corpuri Babesh-Negri cu rabie, corpuri Guarnieri cu variolă etc.). Dimensiunile particulelor virale și ale corpurilor-incluziuni pot fi crescute artificial prin metode speciale de prelucrare a preparatelor cu mordant și impregnare (de exemplu, metoda de argintare conform lui Morozov) și observate cu microscopie prin imersie. Virioni mai mici care se află în afara vederii unui microscop optic sunt detectați numai cu microscopie electronică. Există diferite puncte de vedere cu privire la incluziunile intracelulare. Unii autori cred că reprezintă o colecție de viruși. Alții cred că apar ca urmare a reacției celulei la introducerea virușilor.

Genetica virusului... Modificarea (modificări ne-moștenite) a virușilor este cauzată de caracteristicile celulei gazdă în care se reproduce virusul. Virușii modificați dobândesc capacitatea de a infecta celule similare cu cele în care au fost modificați. Diferitele viruși se manifestă în moduri diferite. De exemplu, forma „petelor negative” (colonii de fagi) se modifică în fagi.

Mutația - la viruși, apare sub influența acelorași mutageni care provoacă mutația bacteriilor (factori fizici și chimici). O mutație apare în timpul replicării acidului nucleic. Mutațiile afectează diferite proprietăți ale virușilor, de exemplu, sensibilitatea la temperatură etc.

Recombinarea genetică în viruși poate apărea ca urmare a infecției simultane a unei celule gazdă cu doi viruși, în timp ce genele individuale pot fi schimbate între doi viruși și se formează recombinați care conțin genele a doi părinți.

Reactivarea genetică a genelor apare uneori atunci când un virus inactivat este încrucișat cu unul complet, ceea ce duce la salvarea virusului inactivat.

Genetica spontană și direcționată a virușilor are o mare importanță în dezvoltarea procesului infecțios.

Rezistent la factorii de mediu... Majoritatea virușilor sunt inactivați prin acțiune temperaturi mari... Cu toate acestea, există excepții, de exemplu, virusul hepatitei este rezistent la căldură.

LA temperaturi scăzute virușii nu sunt sensibili, razele ultraviolete ale soarelui au un efect inactivant asupra virușilor. Lumina soarelui împrăștiată acționează asupra lor mai puțin activ. Virușii sunt rezistenți la glicerol, ceea ce face posibilă menținerea lor în glicerină pentru o lungă perioadă de timp. Sunt rezistente la antibiotice (în timpul cultivării virusurilor, materialul testat este tratat cu antibiotice pentru a suprima flora bacteriană).

Acizii, alcalii, dezinfectanții inactivează virușii. Cu toate acestea, unii viruși inactivați cu formalină își păstrează proprietățile imunogene, ceea ce face posibilă utilizarea formalinei pentru vaccinuri (vaccin antirabic).

Susceptibilitatea animalelor... Gama de animale sensibile pentru unele virusuri este foarte largă, de exemplu, multe animale sunt sensibile la virusurile rabiei. Unele virusuri afectează doar o specie de animal, de exemplu virusul ciumei canine afectează numai câinii. Există viruși la care animalele nu sunt sensibile - de exemplu, virusul rujeolei etc.

Organotropia virușilor... Virușii au capacitatea de a infecta anumite organe, țesuturi și sisteme. De exemplu, virusul rabiei atacă sistemul nervos. Virusul variolei este dermatropic etc.

Eliberarea de viruși în mediu... Dintr-un corp bolnav, virușii pot fi excretați în fecale, de exemplu, virusul poliomielitei și alte enterovirusuri. Virusul rabiei este excretat în salivă, virusul gripal este eliminat din descărcarea mucoasei nazofaringiene etc.

Principalele căi de transmitere a virușilor... Picături în aer (gripă, variolă), alimente (poliomielită, hepatită A), contact de uz casnic (rabie), transmisibil (encefalită).

Imunitatea antivirală... Corpul uman are o rezistență înnăscută la anumiți viruși. De exemplu, oamenii nu sunt sensibili la virusul ciumei canine. Animalele nu sunt sensibile la virusul rujeolic. În aceste cazuri, imunitatea antivirală se bazează pe absența celulelor capabile să susțină reproducerea virușilor.

Imunitatea antivirală este determinată atât de factori de apărare celulari, cât și umorali, nespecifici și specifici. Factori nespecifici. Un inhibitor puternic al reproducerii virale este o substanță proteică - interferonul. LA corp sanatos este conținut într-o cantitate mică, iar virusurile contribuie la producerea de interferon și cantitatea sa crește semnificativ. Este nespecific, deoarece blochează reproducerea diferiților viruși. Cu toate acestea, are specificitate tisulară, adică celulele din diferite țesuturi formează interferon diferit. Se crede că mecanismul său de acțiune constă în faptul că interferează cu sinteza proteinelor din celula gazdă și astfel oprește reproducerea virusului.

Factorii specifici ai imunității antivirale includ anticorpi care neutralizează virusul, hemaglutinarea și precipitarea.

Metode de cultivare a virusului... Virușii se reproduc numai în celule viabile. Sunt cultivate: la embrioni de pui (Fig. 53), culturi de țesuturi ale oamenilor și ale diferitelor animale, în corpul animalelor sensibile, artropode sensibile.

În prima perioadă a dezvoltării virologiei, principala metodă de studiere a virușilor a fost infecția artificială a animalelor, dar această metodă este complicată și, pe lângă aceasta, animalele s-au dovedit a fi imune la mulți viruși.

O mare importanță în dezvoltarea virologiei a fost introducerea metodelor pentru cultivarea virușilor în embrioni de pui și în cultura celulelor țesuturilor umane și animale.

Infecția embrionului de pui... Pentru reproducerea virușilor se utilizează embrioni de pui cu vârsta cuprinsă între 7-12 zile, incubați într-un termostat la 37 ° C. O condiție necesară pentru dezvoltarea corectă a embrionului este respectarea unei anumite umidități a aerului, care poate fi creată prin plasarea unui vas cu apă în termostat.

Adecvarea unui embrion de pui pentru infecție este determinată de prezența mișcărilor embrionului și a unei rețele dezvoltate de vase de sânge pe membrana corion-alantoică atunci când se scanează cu un ovoscop.

Cultivarea virușilor în embrionii de pui se efectuează în diferite locuri ale embrionului, care este infectat (vezi Fig. 53):

1) pe membrana corion-alantoică,

2) în cavitatea alantoică;

3) în cavitatea amniotică;

4) în sacul gălbenușului.

Embrionii de pui sunt infectați într-o cutie folosind instrumente sterile. Înainte de infecție, embrionii de pui sunt șterși de două ori cu un tampon de bumbac umezit cu alcool.

Infecție pe membrana corion-alantoică. După dezinfecție, ouăle sunt tăiate cu atenție o bucată din coajă de la capătul contondent, membrana cojii este îndepărtată și membrana corion-alantoică este găsită. Materialul infecțios în cantitate de 0,1-0,2 ml folosind o seringă sau o pipetă Pasteur se aplică pe membrana corion-alantoică. După infecție, orificiul este închis cu un capac și spațiul dintre acesta și embrionul puilor este umplut cu parafină.

Pe cealaltă parte a oului, scrieți în creion numele materialului infecțios și data infecției.

Infecție în cavitatea amniotică. Oul este ovoscopat și pe partea laterală este selectat un loc în care corion-alantoida este lipsită de vase de sânge mari. Această zonă este marcată cu un creion. Ouăle sunt așezate pe un suport în poziție orizontală, dezinfectate și o gaură în coajă este străpunsă cu o suliță sterilă specială la o adâncime de 213 mm, prin care un ac cu material infecțios este introdus la aceeași distanță direct în cavitatea amniotică. Pentru a preveni scurgerea lichidului injectat înapoi, se face o puncție deasupra airbag-ului, după care ambele găuri sunt umplute cu parafină.

Infecție în cavitatea alantoică. Infecția se efectuează într-o cutie întunecată. Se observă spațiul aerian, coaja peste spațiul aerian este dezinfectată și un ac de seringă cu materialul este introdus prin orificiul din coajă spre embrion. Dacă acul pătrunde în cavitatea alantoică, atunci umbra embrionului este deplasată. După infecție, gaura este umplută cu parafină.

Infecție în sacul gălbenușului. Coaja este dezinfectată. Oul este așezat pe suport, cu capătul tocit în dreapta, astfel încât sacul gălbenușului să fie orientat în sus. O gaură este perforată deasupra camerei de aer din centru. Prin orificiul din coajă într-o direcție orizontală până la o adâncime de 2-3 mm, se introduce un ac de seringă, care intră în sacul gălbenușului. Materialul este injectat într-un volum de 0,2-0,3 ml. După introducerea materialului, gaura este ceruită.

Regimul de temperatură și durata incubației depind de proprietățile biologice ale virusului introdus.

Ouăle infectate sunt verificate zilnic - ovoscopie pentru a verifica viabilitatea embrionului. Dacă embrionii mor în prima zi, atunci cauza este de obicei trauma în timpul infecției. Astfel de ouă sunt derivate din experiență.

Dacă este necesar să se examineze separat fiecare componentă a embrionului, materialul este colectat într-o anumită ordine: lichidul alantoic este aspirat, apoi lichidul amniotic, membrana corion-alantoică este tăiată, membrana amniotică, embrionul, sacul gălbenușului sunt separate și abia apoi membrana corion-alantoică este îndepărtată, separându-l de interior suprafața cochiliei. Prezența virusului în embrionul infectat este determinată de modificările caracteristice ale membranei corion-alantoice a embrionului de pui infectat.

Virușii care nu au activitate de hemaglutinare sunt detectați utilizând CSC.

Pentru a detecta virusul în fluidele alantoice sau amniotice ale embrionilor infectați, se plasează RHA (hemaglutinarea este cauzată de fluide alantoice sau amniotice sau de o suspensie preparată din membrana corion-alantoică).

Cultivarea virușilor în cultura celulară... Pentru acumularea de viruși în culturi celulare sensibile, se utilizează țesuturi ale oamenilor și ale diferitelor animale. Cea mai mare aplicație practică a fost primită de culturile cu un singur strat de linii celulare primare tripsinizate și transplantate.

Culturile celulare cu un singur strat sunt cultivate în vase de saltea plate din sticlă. Suspensia celulară într-un mediu nutritiv lichid la o temperatură de 37 ° C face posibilă obținerea unui strat de celule "in vitro" cu o anumită structură histologică. Prezența virușilor în culturile de țesuturi este detectată prin schimbarea (degenerarea) celulelor. Tipul de viruși este determinat prin neutralizarea efectului virușilor prin adăugarea de seruri specifice de tip adecvate materialului vaccinat.

Aceste metode permit încorporarea mai rapidă a rezultatelor cercetării și sunt mai rentabile. În cazurile în care virușii nu provoacă acțiune citopatică (degenerare) și nu se dezvoltă la embrioni de pui, se utilizează metode de infectare a animalelor (vezi capitolul 11).

Pentru cultivarea virușilor se utilizează celule continue, care se obțin mai des din celule de tumori maligne.

Culturile cu un singur strat se obțin din embrioni umani, de pui, animale.

Avantajul culturilor de celule cu un singur strat este simplitatea tehnicii și ușurința contabilității.

Capacitatea celulelor de a se reproduce în afara corpului este legată de gradul de diferențiere a țesuturilor. Țesuturile mai puțin diferențiate au o capacitate mai mare de proliferare (țesut conjunctiv, epitelial).

Esența metodelor pentru prepararea culturilor de țesut primar este distrugerea țesutului intercelular și separarea celulelor pentru producerea ulterioară a unui monostrat.

Disocierea celulelor se efectuează acționând asupra țesutului enzimelor proteolitice, cel mai adesea tripsină. Soluția de tripsină promovează separarea celulelor, menținându-și în același timp capacitatea de reproducere. Cultivarea celulelor în creștere necesită un mediu nutritiv. Compoziția mediului este complexă, include o serie de ingrediente: aminoacizi, glucoză, vitamine, săruri minerale, coenzime etc. Cultura țesuturilor se obține în condiții strict aseptice. Antibioticele (500 U de penicilină și 250 U de streptomicină în 1 ml) sunt adăugate la mediu pentru a suprima creșterea florei bacteriene.

Țesutul preparat este turnat cu o soluție 0,25% de tripsină încălzită și incubat într-un termostat la 37 ° C. În timpul incubării, țesutul este agitat periodic prin rotirea balonului. Celulele tripsinizate sunt centrifugate la 800-1000 rpm timp de 5 minute.

Tripsinizarea și centrifugarea se efectuează foarte atent pentru a nu răni celulele. După centrifugare, supernatantul este îndepărtat și sedimentul celular este plasat într-un volum mic de mediu de cultură. Pentru a obține o masă omogenă, suspensia celulară este filtrată printr-un strat de tifon într-o pâlnie (sterilă). Suspensia celulară este verificată pentru sterilitate prin inocularea a 0,1 ml în 2 tuburi cu bulion de zahăr.

Succesul cultivării celulelor depinde de doza de inoculare, prin urmare, după tripsinizare, celulele sunt numărate în camera Goryaev. După numărare, suspensia de celule este diluată cu un mediu nutritiv în așa fel încât 1 ml conține 500.000-1.000.000 de celule și este turnat în eprubete și saltele. Tuburile de cultură a țesuturilor sunt incubate într-un incubator într-o poziție înclinată.

Culturile inoculate sunt examinate zilnic la un microscop cu mărire redusă pentru a determina natura creșterii lor. Celulele normale care proliferează sunt de culoare deschisă și cresc într-un singur strat. Dacă celulele sunt întunecate, granuloase și nu proliferează, ceea ce poate fi rezultatul contaminării (manipularea slabă a vaselor sau a ingredientelor contaminate), atunci astfel de culturi sunt eliminate din experiment.

Schimbarea mediului nutritiv la 2-3 zile după însămânțare îmbunătățește intensitatea proliferării.

Celulele normale, bine proliferante, sunt infectate cu materialul testat.

Culturile transplantate se obțin în principal din tumori maligne. Tulpina Hela - cultura celulelor cancerului de col uterin ale unei femei pe nume Helena (obținută în 1950); tulpina Hep-2 izolată de la un pacient cu cancer laringian. Creșterea acestor celule este menținută în laboratoare prin pasaje succesive. Particularitatea lor constă în faptul că se reproduc mult timp. În prezent, aceste celule au trecut prin mii de generații. În timpul pasajului, ei pierd unele proprietăți morfologice și biochimice - suferă mutații. Cu toate acestea, ele rămân destul de potrivite pentru cultivarea virusurilor din ele. Cultura acestor celule este utilizată de laboratoare din întreaga lume.

Reproducerea virusului în cultura celulară are loc în momente diferite, în funcție de proprietățile virusului și de tipul de celule.

Prezența virusului este judecată de efectul citopatic. Degenerescența celulară este observată la microscop. Momentul acțiunii citopatice și natura sa depind de doza și proprietățile virusului.

La unele virusuri, un efect citopatic este detectat după câteva zile (virusul variolei), la altele, după 1-2 săptămâni (virusul hepatitei etc.).

În prezent, există deja sute de viruși despre care se știe că infectează oamenii. Lupta impotriva infecții virale efectuate prin diferite metode. Imunizarea este cea mai eficientă. În acest fel, variola a fost eliminată, iar incidența poliomielitei a fost redusă. Prevenirea socială este importantă în lupta împotriva infecțiilor virale - distrugerea câinilor fără stăpân (lupta împotriva rabiei), prevenirea personală etc.

Cu toate acestea, aceste măsuri nu pot asigura eliminarea tuturor boli virale... Oamenii de știință caută în mod constant modalități de a infecta virusul fără a deteriora celula în care se află.

Prin urmare, este firesc ca în programul Partidului Comunist al Uniunii Sovietice virologia să fie numită una dintre ramurile principale ale științelor naturii, care ar trebui să primească o dezvoltare prioritară în următorii ani.

Metode de bază de cercetare a virușilor... 1. Reacția hemaglutinării, reacția hemaglutinării întârziate, reacția hemaglutinării indirecte. Reacție de legare a complementului.

2. Reacția de neutralizare a virușilor în cultura țesuturilor.

3. Metoda imunofluorescenței.

4. Metoda histologică - identificarea incluziunilor (corpurile mici ale lui Babesh - Negri - cu rabie; Corpurile mici ale lui Pașen - cu variolă etc.).

5. Metoda biologică.