Причини появи вільної рідини у просторі Дугласа (позадиматочному). Сучасні проблеми науки та освіти Як порахувати аналіз перитонеальної рідини

1

За допомогою двовимірного електрофорезу та часпрогонової мас-спектрометрії вивчено протеомний профіль перитонеальної рідини при зовнішньому генітальному ендометріозі. Виявлено білки відмінності, що з'являються при зовнішньому генітальному ендометріозі: аполіпопротеїн А-IV, глобулін, що зв'язує статеві гормони, компоненти системи комплементу С3 та С4b. До білків, відсутніх при зовнішньому генітальному ендометріозі, відносяться фактор диференціювання пігментного епітелію, транстиретин, гаптоглобін, α-1-антитрипсин та інгібітор апоптозу 6. Обговорюється можливе значення ідентифікованих білків у розвитку основних порушень. Виявлені білки відмінності можуть бути використані як маркери цього захворювання.

зовнішній генітальний ендометріоз

перитонеальна рідина

протеомний аналіз

білки відмінності

1. Адамян, Л.В. Ендометріози: посібник для лікарів / Л.В. Адамян, В.І. Кулаков, О.М. Андрєєва / / М.: Медицина, 2006. - 416 с.

2. Говорун, В.М. Протеомні технології в сучасній біомедичній науці/В.М. Говорун, А.І. Арчаков// Біохімія. - 2002. - № 10. - С.1341-1359.

3. Дедуль, М.І. Система протеолізу в сироватці крові та перитонеальної рідини при хірургічному лікуванніхворих на ендометріоз / М.І. Дедуль, Л.Є. Радецька, Л.М. Цегла // Новини хірургії. - 2006. - № 3. - С.74-80.

4. Іщенко, А.І. Ендометріоз: діагностика та лікування / А.І. Іщенко, Є.А. Кудріна // М.: Геотар-МЕД, 2002. - 104 с.

5. Лінде, В.А. Протеомні технології у вивченні ендометріозу/В.А. Лінде, Л.Р. Томай, В.О. Гунько та ін. // Мед. вестн. Півдня Росії. - 2013. - № 4. - С.12-16.

6. Мінкевич, Н.І. PEDF-неінгібіторний серпін з нейропротекторною та антиангіогенною активностями / Н.І. Мінкевич, В.М. Ліпкін, І.А.Костанян // ActaNaturae. - 2010. - № 3. - С.74-84.

7. Bedaiwy, M.A. Peritoneal fluid environment in endometriosis. Clinicopathological implications / M.A. Bedaiwy, T. Falcone // Minerva Ginecol. -2003. - V.55, N 4. - P.333-345.

8. Bernard, K.R. Методи у функціональних proteomics: два-dimensionalpolyacrylamide gel electrophoresis with immobilized pH gradients, in-gel digestion and identification proteins by mass spectrometry / K.R. Bernard, K.R. Jonscher, K.A. Resing, N.G.Ahn // Methods Mol. Biol. - 2004. -V. 250. - P. 263-282.

9. Hammond, G.L. Різні ролі для sex hormone-binding globulin in reproduction / G.L. Hammond / / Biol. Reprod. - 2011. - V. 85, N 3. - P.431-441.

10. Kabut, J. Levels of complement components iC3b, C3c, C4, і SC5b-9 в перитонеальному fluid і serum of infertile women with endometriosis / J. Kabut, Z. Kondera-Anasz, J. Sikora et al. // Fertil. Steril. -2007. - V.88, N 5. - P.1298-1303.

11. Richardson SJ. Cell and molecular biology of transthyretin and thyroid hormones / S.J. Richardson // Int. Rev. Cytol. - 2007. - V. 258. - P.137-193.

12. Sarrias M.R. Як для людського Sp alpha як pattern recognition receptor / M.R. Sarrias, S. Roselló, F. Sánchez-Barbero та ін. // J. Biol. Chem. - 2005. - V. 280, N 42. - P. 35391-35398.

13. Spaulding H.L. Apo A-IV: update on regulation and physiologic functions / H.L. Spaulding, E. Delvin, M. Lambert та ін. / / Biochim. Biophys. Acta. - 2003. - V.1631, N 2. - P.177-187.

14. Wassell J. Haptoglobin: function and polymorphism / J.Wassell // Clin. Lab. -2000. - V. 46, N 11-12. - P.547-552.

Актуальність вивчення зовнішнього генітального ендометріозу (НГЕ) пов'язана з високою частотою поширення цієї патології серед жінок дітородного віку та її суттєвим впливом на їх репродуктивне здоров'яі рівень життя. В даний час показано важлива рольперитонеальної рідини (ПЗ) у патогенезі ендометріозу, т.к. саме в ній відбувається розвиток та зростання ендометріоїдних вогнищ. Дослідження білкового складу ПЗ за допомогою протеомних технологій, спрямованих на вивчення сукупності білків, що експресуються геномом, створює якісно нові можливості для поглиблення уявлень про молекулярні механізми розвитку ендометріозу, його прогнозування та ранньої діагностики.

Мета роботи. Вивчити протеомний спектр ПЗ жінок з НГЕ та без НГЕ.

Матеріал та методи дослідження

У дослідження було включено 20 пацієнток репродуктивного віку (середній вік 29,3±0,3 року), з них 10 пацієнток з НГЕ з III-IV стадіями захворювання згідно з класифікацією r-AFS (основна група) та 10 - без ендометріозу (контрольна група) ). Матеріалом дослідження служила ПЗ, отримана з позаду-маткового простору при виконанні лапароскопії. Протеомний аналіз ПШ проводили за допомогою двовимірного електрофорезу в поліакриламідному гелі (прилади Protein IEFCell та ProteanIIxiMulti-Cell, Bio-Rad, США) з подальшим фарбуванням білків іонами срібла. Ідентифікацію білків після їх трипсинолізу проводили методом проміжної часу MALDI-мас-спектрометрії на мас-спектрометрі AutoflexII (Bruker, Німеччина) з використанням програми MascotMSSearch (MatrixScience, США) і баз даних NCBI і Swiss-Prot.Результати ідентифікації білків не менше 95% і показник сіквенс-покриття не менше 60%.

Достовірність відмінностей у протеомному спектрі ПЗ жінок контрольної та основної груп визначали за допомогою c2-критерію (програма Statistica версія 6.0. фірми StatSoft. Jnc.). Результати оцінювали як статистично значущі при p<0,05.

Результати дослідження та їх обговорення

В результаті проведеного протеомного аналізу ПЗ виявлено низку білків відмінності, присутність або відсутність яких має місце тільки при НГЕ (див. табл., рис.). Так, у ПЗ жінок основної групи встановлено появу наступних білків: аполіпопротеїну А-IV, глобуліну, що зв'язує статеві гормони (ГСПГ), компонентів системи комплементу С3 та С4b, не виявлених у пацієнток контрольної групи.

Таблиця 1

Ідентифіковані білки ПЖ жінок контрольної та основної груп

	Назва білка
	α-1-антитрипсин
	Чинник диференціювання пігментного епітелію
	Компонент системи комплементу C3
	Аполіпопротеїн A-IV
	Гаптоглобін
	Глобулін, що зв'язує статеві гормони
	Інгібітор апоптозу 6
	Компонент системи комплементу C4-b
	Транстиретин

Примітка: pI – ізоелектрична точка, Mm-молекулярна маса, «+» – присутність білка, «-» – відсутність білка, p – достовірність відмінностей між групами.

А Б

Мал. 1. Протеомні карти перитонеальної рідини жінок контрольної (А) та основної (Б) груп

Примітка. Нумерація білків відповідає такій таблиці

Збільшення продукції (і, як наслідок, поява в ПЖ) аполіпопротеїну A-IV, що володіє антиоксидантними та антиінфламаторними властивостями, очевидно, має компенсаторне значення в умовах окисного стресу та запалення, що супроводжують розвиток цієї патології.

Підвищений вміст при ендометріозі ГСПГ, що регулює біодоступність стероїдних гормонів для ендометріальних клітин, створює умови для локальної гіперестрогенії. У цих умовах стає можливим посилення проліферативного потенціалу клітин ендометріоїдних гетеротопій.

Посилення секреції перитонеальними макрофагами компонентів системи комплементу С3 і С4b, що беруть участь у запальній реакції, знешкодженні апоптозних клітин та імунних комплексів, робить певний внесок у механізми розвитку ендометріозу та ендометріоз-асоційованого безпліддя.

Поряд із цими відхиленнями при НГЕ в протеомному спектрі ПЗ відсутні 5 білків: фактор диференціювання пігментного епітелію, транстиретин, інгібітор апоптозу 6, гаптоглобін та α-1-антитрипсин.

Фактор диференціювання пігментного епітелію є одним з найбільш потужних антиангіогенних та антипроліферативних факторів, тому пригнічення його експресії може бути однією з причин, що призводять до зниження ендометріального апоптозу та посилення ангіогенезу, сприяючи імплантації та росту гетеротопій.

Відсутність у ПЗ жінок основної групи транстиретину, що здійснює транспорт Т3 і Т4, мабуть, створює локальний надлишок гормонів щитовидної залози, токсична дія яких призводить до ураження репродуктивних органів. Тиреоїдні гормони, модулюючи ефекти естрогенів на клітинному рівні, можуть сприяти розвитку порушень гісто- та органогенезу гормоночутливих структур та погіршенню перебігу ендометріозу.

Серед білків, не виявлених при НГЕ, важливу роль у регуляції імунної відповіді виконує інгібітор апоптозу, що секретується макрофагами 6 . Можливо, саме порушення експресії цього білка призводить до формування дисбалансу імунокомпетентних клітин ПЖ (за рахунок придушення апоптозу Т-лімфоцитів та NK-клітин).

Відсутність в ПЖ неферментативного антиоксиданту гаптоглобіну, можна вважати, робить внесок у посилення окислювального стресу, що розвивається при ендометріозі.

При зазначеній патології в ПЗ також не виявлено α-1-антитрипсин – інгібітор серинових протеаз, які безпосередньо залучені до процесів інвазії ендометріальних клітин, що, мабуть, зумовлює дисбаланс у системі протеазу-інгібітор, сприяючи імплантації ендометріальних клітин.

Проведені дослідження свідчать, що розвиток ендометріозу відбувається на тлі зміни продукції ряду важливих білків, що беруть участь у регуляції дії гормонів, ангіогенезу, апоптозу, редокс-процесів, запалення та імунної відповіді.

Висновки

1. Модифікація протеомного спектра ПЗ є важливим патогенетичним фактором розвитку НГЕ.

2. Білки, які відсутні або з'являються в ПЖ при ендометріозі, можуть бути інформативними маркерами даного захворювання.

Рецензенти:

Авруцька В.В., д.м.н., провідний науковий співробітник акушерсько-гінекологічного відділу, завідувач поліклінічним відділенням ФДБУ «РНДІАП» МОЗ Росії. Федеральна державна бюджетна установа «Ростовський науково-дослідний інститут акушерства та педіатрії» МОЗ Росії, м. Ростов-на-Дону;

Каушанська Л.В., д.м.н., головний науковий співробітник акушерсько-гінекологічного відділу ФДБУ «РНДІАП» МОЗ Росії. Федеральне державне бюджетне установа «Ростовський науково-дослідний інститут акушерства та педіатрії» МОЗ Росії, м. Ростов-на-Дону.

Бібліографічне посилання

Томай Л.Р., Лінде В.А., Єрмолова Н.В., Гунько В.О., Погорєлова Т.М. РОЛЬ ПРОТЕМНОГО ДИСБАЛАНСУ ПЕРИТОНЕАЛЬНОЇ РІДИНИ У ПАТОГЕНЕЗІ ЗОВНІШНЬОГО ГЕНІТАЛЬНОГО ЕНДОМЕТРІОЗУ // Сучасні проблеми науки та освіти. - 2014. - № 6.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=17171 (дата звернення: 01.02.2020). Пропонуємо до вашої уваги журнали, що видаються у видавництві «Академія Природознавства»

Перитонеальна рідина- це мастильна рідина (вироблена і поглинається очеревиною), що знаходиться в черевної порожнини. Черевна порожнина це простір між абдомінальними органами (наприклад, шлунком, селезінкою, печінкою та жовчним міхуром) та мембраною, що вистилає стінки живота.

Перитоніальна рідина – прозора, стерильна рідина, що складається в основному з води та невеликої кількості лейкоцитів, антитіл, електролітів та інших біохімічних речовин. Основною функцією перитоніальної рідини є зменшення тертя, що викликається рухом органів черевної порожнини.

Причини проведення аналізу

У здорових людей у ​​черевній порожнині міститься невелика кількість перитоніальної рідини. Але певні проблеми можуть призвести до її надмірного нагромадження. Ця рідина, яку також називають асцитичною, може призвести до стану, що називається асцит. Це з ускладнень, викликаних цирозом.

Деякі інфекції та мікроорганізми також можуть викликати перитоніт – запалення перитоніальної мембрани.

У такому разі проводиться посів перитоніальної рідини. Він потрібен для того, щоб діагностувати проблему та розпочати лікування.

Посів перитонеальної рідини

Це лабораторний тест, під час якого з черевної порожнини береться проба рідини, яка потім досліджується на мікроорганізми, бактерії і грибки, здатні викликати інфікування.

Процедура

З черевної порожнини витягнуть трохи перитоніальної рідини, яку потім направлять до лабораторії, де проведуть посів та забарвлення за грамом. Процедура взяття зразка називається.

Підготовка

Перед початком лапароцентезу необхідно випорожнити сечовий міхур.

Місце проколу очистять антисептиком.

Знеболять (за допомогою місцевої анестезії).

Вставлять голку (або тракар з конюлею, для чого можуть зробити невеликий розріз) і витягнуть зразок рідини.

При вилученні великого об'єму рідини пацієнт може відчути слабке запаморочення.

Ризики, пов'язані з процедурою

Існує невеликий ризик того, що голка проколе сечовий міхур, кишечник або кровоносну судину. Це може призвести до перфорації та кровотечі або інфікування кишечника.

Рак яєчників та шийки матки є головними видами раку, що призводить до смерті жінок. Підступність цих хвороб у тому, що часто вони ніяк не виявляють себе або мають слабо виражені симптоми. Через це пухлина може зрости до серйозних розмірів, перш ніж її виявлять. Цитологічне дослідження перитонеальної рідини може бути дуже корисним при виявленні ракових клітин або інших генетичних аномалій яєчників та шийки матки на ранній стадії.

УДК 579.842.23+ 616-092.19

Т.П. Старовойтова, Т.А. Іванова, Г.Б. Мухтургін, С.А. Витязєва, В.І. Дубровіна,

К.М. Коритов, С.В. Балахонів

ЗМІНИ КЛІТИННОГО СКЛАДУ ПЕРИТОНЕАЛЬНОЇ РІДИНИ БІЛИХ МИШЕЙ ПРИ ІНФЕКЦІЙНОМУ ПРОЦЕСІ, ВИКЛИКАНОМУ YERSINIA PESTIS C РІЗНИМ ПЛАЗМІДНИМ СКЛАДОМ

Іркутський науково-дослідний протичумний інститут Сибіру та Далекого Сходу (Іркутськ)

У статті наведено дані про вплив плазмідного складу чумного мікроба на субпопуляційний склад мононуклеарних клітин перитонеальної рідини білих мишей на ранніх термінах інфекційного процесу. Показано, що зміна клітинного складу перитонеальної рідини експериментальних тварин залежить від плазмідного профілю штамів чумного мікроба. В ході експерименту також виявлено фазність у зміні кількісного складу опасистих клітин перитонеальної рідини білих мишей, інфікованих штамами Yersinia pestis з різним плазмідним спектром. Ключові слова: Yersinia pestis, перитонеальна рідина, вірулентність

CHANGES IN CELLULAR COMPONENTS OF PERITONEAL FLUID OF WHITE MICE WITH INFECTION CAUSED BY YERSINIA PESTIS WITH DIFFERENT PLASMID PROFILE

TP. Старовойтова, Т.А. Іванова, Г.В. Mukhturgin, S.A. Витиязева, В.І. Dubrovina,

K.M. Коритов, С.В. Balakhonov

Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East, Irkutsk

Матеріали зображені на темі на influence of Yersinia pestis plasmid profile на структурі subpopulation mononuclear builds of peritoneal fluid of mice at early stages of infectious process. Вона була доведена, що зміна структурної композиції перитонеального fluidу experimentals animals depending on plasmid profile of Yersinia pestis strains. Зміна характеру в змінах площинної композиції з масивними клітинами перитонеального fluid white mice infected with Y. pestis strains with different plasmid spectrum determined. Key words: Yersinia pestis, перитонеальний fluid, virulence

Переважна більшість факторів вірулентності Yersinia pestis пов'язані з плазмідним складом. Геном збудника чуми основного підвиду - Yersinia pestis subspecies pestis - має три плазміди - рУУ(45МДа), pYP(6M№) та рYТ(61МДа), їхня роль добре вивчена у реалізації патогенних властивостей ієрсиній. З наявністю плазміди pYV штами ієрсиній виявляють багато фенотипічних ознак: клітинну адгезію, аутоаглютинацію, поверхневу аглютинацію, а також синтез білків зовнішньої мембрани, у тому числі V- і W-антигенів та інших білків, дія яких спрямована на пригнічення системи. Плазміди рYPі рYТ ві-доспецифічні. Плазміда рYP детермінує синтез бактеріоцину пестицину 1 і активатора плазміно-гену, а плазміда рYТ кодує два найбільш добре вивчені фактори вірулентності - мишачий токсин і F1 капсули. Відмінною ознакою збудника, що циркулює в Тувінському вогнищі, є наявність у його геномі додаткової четвертої плазміди рТРЗЗ з нез'ясованими функціями. Припускають, що дана плазміда є генетично модифікованим варіантом резидентної плазміди 9,5 kD, що несе гени pla (активатор плазміногену) і pstl (пестицин 1) . Втратаплазмід призводить до зміни біохімічних, культуральних властивостей, а також до зниження або повної втрати вірулентності збудника.

Провідною клінічною ознакою чумної інфекції та інтоксикації, що визначає тяжкість перебігу

та результат захворювання, є порушення гомеостазу макроорганізму. Первинними мішенями для ендотоксину є поліморфноядерні лейкоцити, макрофаги, моноцити, клітини ендотелію та інші клітинні елементи. Зміна клітинного складу перитонеальної рідини можна розцінювати як діагностичний критерій тяжкості хвороби при багатьох захворюваннях, у тому числі при чумі. У зв'язку з цим оцінка кількісного та якісного клітинного складу перитонеальної рідини у білих мишей при інфекційному процесі, викликаному Y. pestis з різним плазмідним складом, становить великий інтерес.

Мета роботи: дослідити динаміку зміни субпопуляційного складу мононуклеарних клітин перитонеальної рідини білих мишей на ранніх термінах експериментальної чумної інфекції.

МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ

Експериментальною моделлю в дослідах служили 175 безпородних, але стандартних за умов утримання та ваги (18-20 г) білих мишей обох статей. Тварин виводили з експерименту відповідно до «Правил лабораторної практики в Російській Федерації», затверджених Наказом МОЗ РФ № 267 від 19.06.2003 р., та Національним стандартом РФ ГОСТ Р 53434-2009 «Принципи належної лабораторної практики».

У роботі використали 6 штамів Y. pestis subsp. pestis та Y. pestis subsp. altaica з колекції музею Ір-

Таблиця 1

Характеристика штамів чумного мікроба, що тестуються.

Штам Місце виділення Плазмідний склад Вірулентність для білих мишей ^Об), м. до.

Y. pestis subsp. pestis І-2638 Тувинське природне вогнище чуми pYP+pYV+pTP33+pYT+ 10 / високовірулентне

Y. pestis subsp. pestis І-3479 Іркутський протичумний інститут pYP+pYV-pTP33+pYT+ авірулентен

Y. pestis subsp. pestis І-3480 Іркутський протичумний інститут pYP-pYV-pTP33+pYT+ авірулентен

Y. pestis subsp. altaica І-2359 Гірсько-алтайське природне вогнище чуми pYP+pYV+pYT+ 4 х 104/слабовірулентне

Y. pestis subsp. altaica І-2948 Гірсько-алтайське природне вогнище чуми pYP-pYV+pYT+ 3 х 108/залишкова вірулентність

Y. pestis subsp. altaica І-2948/3 Іркутський протичумний інститут pYP-pYV-pYT+ авірулентен

кутського науково-дослідного протичумного інституту Росспоживнагляду (табл. 1).

Інтактні білі миші були поділені на 6 досвідчених та 1 контрольну групи по 25 особин у кожній. Тварин дослідних груп заражали Y. pestis у концентрації 1 х 106 м. к. в обсязі 0,5 мл інтрапе-ритонеальним способом. I дослідній групі тварин вводили вирощену при температурі 28 °С дводобову культуру Y. pestis subsp. pestis І-2638, ІІ групі - Y. pestis subsp. pestis І-3479, ІІІ групі - Y. pestis subsp. pestis І-3480, IV дослідну групу тварин заражали референтним Гірсько-Алтайським штамом Y pestis subsp. altaica І-2359, V групу - Y. pestis subsp. altaica І-2948, VI групу – селекційним штамом Y. pestis subsp. altaica І-2948/3.

Забір матеріалу від експериментальних тварин (перитонеальна рідина) проводили через 30, 60, 90, 120 та 180 хвилин. Проводили підрахунок загальної кількості ядерних клітин в 1 мл перитонеальної рідини у фіксованих препаратах, пофарбованих стандартними методами. Для бактеріологічного аналізу кров із серця та перитонеальну рідину (по 0,1 мл) засівали на тверде живильне середовище (агар Хоттінгера, рН 7.2).

Діяльність використовували методи оглядової мікроскопії. Кількісну оцінку загальної кількості лейкоцитів проводили з використанням уніфікованого методу підрахунку клітин у камері Горяєва. Процентне співвідношення різних видів лейкоцитів проводили методом морфологічного дослідження перитонеальної рідини у мазках. При дослідженні препаратів з використанням комп'ютерної програми MoticImagesPlus (версія 2) здійснювали диференційований підрахунок тканинних базофілів (ТК), вимірювали їх діаметр і площу. Ступінь активізації ТК оцінювали за індексом дегрануляції клітин (ІДТК) - відсоткове співвідношення дегранульованих гладких базофілів до їх загального числа.

Автоматичний аналіз зображення проводили за допомогою світлового мікроскопа Zeiss (Німеччина) з відеокамерою Moticam 2000, роздільна здатність 1392 х 1040 пікселів, бл. 10, про. 100.

Значимість результатів дослідження отримували математичними методами статистичної обробки із застосуванням порівняльного аналізу за t-критерієм Стьюдента та із застосуванням комп'ютерної програми Statistica, версія 6.0 (StatSoft Inc. 19842001, ІПЧІ 31415926535897) та пакету програм

Microsoft Office Excel (2003). Результати вважали значущими щодо контролю при р< 0,05.

РЕЗУЛЬТАТИ І ОБГОВОРЕННЯ

Загальна кількість клітин у перитонеальній рідині у інтактних тварин становить 4,3 ± 0,9 х 103 в 1 см3, при цьому макрофаги є переважним клітинним типом і становлять 60,5 ± 5,6 % від загальної кількості клітин, а частку лімфоцитів доводиться 17,0±2,8%; 5,5±0,8% становлять клітини мезотелію та інші клітинні елементи.

У інфікованих білих мишей спостерігається фазність у зміні загальної кількості ядерних клітин. У тварин, заражених вірулентним штамом Y. pestis subsp. pestis І-2638 через 30 хв загальна кількість ядерних клітин різко зростає до 1,5 ± 0,4 х 104 в 1 см3, що перевищує показники у інтактних тварин в 3,4 рази. До 60 хв дослідження показники знижуються до інтактних значень, продовжуючи зменшуватись у наступні терміни. Цитологічна картина перитонеальної рідини має чіткий взаємозв'язок із заражаючою культурою. У тварин І групи через 30 хв після інфікування відмічено збільшення кількості лімфоцитів, що перевищує значення інтактних тварин в 4 рази за рахунок різкого зниження числа моноцитів. Ці зміни виявлені у всі терміни спостереження. У перитонеальній рідині білих мишей, інфікованих Y. pestis subsp. pestis І-2638, через 120 хв від початку експерименту зареєстровано збільшення кількості сегментоядерних нейтрофілів у 2,5 рази порівняно з контролем (р< 0,05), и незначительное увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов. На последнем сроке исследования в мазках перитонеальной жидкости выявляется большое количество фибробластов, агрегация лимфоцитов и большое количество делящихся клеток.

У білих мишей, заражених Y. pestis subsp. altaica І-2359, Y. pestis subsp. pestis І-3479 та Y. pestis subsp. altaica І-2948/3 через 30 хв після початку експерименту статистично значущі зміни відсутні. До 180 хв кількість ядерних клітин у перитонеальному ексудаті перевищує показники в контролі в 2,8 (р< 0,01), 1,9 (р < 0,05) и 1,5 раза соответственно. При введении животным Y. pestis subsp. pestis И-3480 и Y. pestis subsp. altaica И-2948 через 30 мин отмечается повышение общего числа ядерных клеток с последующим снижением (120 мин) до уровня контроля, и к 180 мин показатель вновь увеличивается.

Під час перегляду мазків перитонеальної рідини у тварин усіх дослідних груп реєструється клітинна проліферація лімфоцитів, гістіоцитів, збільшення еозинофілів, тканинних базофілів, плазмозів, клітин мезотелію та фібробластів.

Оцінка морфологічних властивостей базофілів, їх кількість та функціональна активність становлять інтерес при дослідженні клітинного складу пе-ритонеальної рідини інфікованих тварин.

Встановлено, що у досвідчених білих мишей відзначається фазність зміни кількісного складу тканинних базофілів перитонеальної рідини. Збільшення їхньої кількості у тварин, заражених Y. pestis subsp. pestis І-2638, реєструється в 60 хв після введення культури, перевищуючи значення у інтактних тварин в 2,6 рази (р< 0,05). Затем данные показатели снижаются (90-120 мин) до значений ин-тактных животных, к 180 мин вновь возрастают, достигая значений 8,5 против 2,5 в контроле (р < 0,05). Часть ТК представлены интестинальными - незрелыми формами (рис. 1), появление которых можно расценивать как процесс компенсации.

Мал. 1. Біла миша, заражена Y. pestis subsp. pestis І-2638. Перитонеальна рідина. Інтестинальні огрядні клітини. Забарвлення за Романовським - Гімзе, ув. х 100.

У перші терміни дослідження атипові ТК становлять 21,0±1,8% від загальної кількості ТК, до останніх термінів дані показники зростають до 25,2±2,1%. Атипові ТК мають мінімальний функціональний потенціал і мають значно менші розміри. Діаметр клітин становить 6,8-8,6 мкм, що у середньому у 2,3 рази менше (р< 0,05), по сравнению с диаметром типичных ТК. Таких клеток значительно меньше в перитонеальной жидкости белых мышей, зараженных Y. pestis subsp. altaica И-2359, и только в период 120-180 мин после заражения отмечаются единичные интестинальные тканевые базофилы. У животных других опытных групп атипичные ТК не выявляются.

У цілому нині активізація системи ТК відбиває загальну адаптивну перебудову організму у відповідь введення антигену. Дегрануляція тканинних базофілів проходить шляхом суцільногранулярного екзоцитозу (рис. 2). Функціональна активність тканинних базофілів перитонеальної рідини дослідних тварин має фазний характер. Найвищий ІДТК відзначається

у білих мишей через 60 хв після зараження Y. pestis subsp. pestis І-2638 - 3,9 ± 0,6, що у 18,5 рази (р< 0,01) выше значения у интактных животных, затем показатель резко снижается, но к 180 мин исследований он вновь повышается, превышая значение в контрольной группе в 4,4 раза (р < 0,01). У селекционных клонов Y. pestis subsp. pestis И-3479 и И-3480 максимальное значение индекса дегрануляции имеет место через 90 мин от начала опыта и составляет 2,0 ± 0,3 и 1,3 ± 0,4 соответственно, при этом у белых мышей II опытной группы показатели во все сроки исследования были выше, чем у животных III опытной группы.

Мал. 2. Біла миша, заражена Y. pestis subsp. pestis І-2638. Перитонеальна рідина. Гладкі клітини. Дегрануляція. Забарвлення за Романовським - Гімзе, ув. х 100.

Найбільш виражений фазний характер зміни тканинних базофілів відзначається у білих мишей IV дослідної групи. Максимальне значення ІДТК припадає на другий та четвертий етапи дослідження, перевищуючи значення інтактних тварин у 5,8 та 7,4 рази (р< 0,05) соответственно. У особей, зараженных Y. pestis subsp. altaica И-2948/3, только на двух сроках исследования (60-90 мин) регистрируется увеличение дегрануляции тучных клеток в 3,6 и 2,6 раза соответственно (р < 0,05), в другие сроки данные статистически не значимы. У белых мышей V опытной группы максимальное значение ИДТК приходится на второй и последний срок исследования - 0,99 и 0,92 у. е., при в контроле отмечается 0,21 у. е.

ВИСНОВОК

Таким чином, розвиток інфекційного процесу в перші години після інокуляції збудника чуми залежить від його плазмідного профілю, оскільки найбільш виражені зміни кількісного та якісного клітинного складу перитонеальної рідини виявлені у експериментальних тварин при зараженні штамами з наявністю pYP+pYV+pYT+.

Виявлена ​​в ході експерименту фазність у зміні кількісного складу опасистих клітин перитонеальної рідини, особливо у особин, заражених вірулентним штамом Y. pestis subsp. pestis І-2638 (pYP+pYV+pTP33+pYT+), а також наявність незрілих та атипових форм ТК свідчить про розвиток процесів компенсації.

У цілому нині активізація системи опасистих клітин відбиває загальну адаптивну перебудову організму у відповідь введення антигену.

ЛІТЕРАТУРА REFERENCES

1. Анісімов А.М. Фактори Ypestis, що забезпечують циркуляцію та збереження збудника чуми в екосистемах природних вогнищ. Повідомлення 1// Молекулярна генетика, мікробіол. та вірусол. – 2002. – № 3. – С. 3-23.

Анісімов А.Н. Factors of Y. pestis виконуючи циркуляцію і обслуговування plague infectious agent в ecosystems of natural foci. Report I // Molekuljarnaja genetika, mikrobiol. i virusol. – 2002. – N 3. – P. 3-23. (in Ukrainian)

2. Балахонов С.В. Виявлення нуклеотидних послідовностей генів pla, pstl та cafl на криптичній плазміді 33 kd штамів Yersiniapestis з тувинського осередку чуми // 8th Int. Symp. на Yersinia. -Турку, Фінляндія, 2002. - №10. - С. 352-355.

Balakhonov S.V. Визначення pla, pstl і cafl gene nucleotide sequences in cryptic plasmid 33 kb Yersinia pestis strains від Tuva plague focus // 8th Int. Symp. на Yersinia. – Turku, Finland, 2002. – N 10. – P. 352-355. (in Ukrainian)

3. Вітязєва С.А., Старовойтова Т.П., Бушкова А.В. Тканинні базофіли як представники численної клітинної популяції АПУД-системи. - Деп. у ВІНІТІ № 376-В2010 17.06.2010. – 18 с.

Витиязева С.А., Старовойтова Т.П., Бушкова А.В. Тіссуе basophiles як репрезентації численних статей населення APUD-системи. - Dep. in VINITI N 376-В2010 17.06.2010. - 18 p. (in Ukrainian)

4. Красноженов Є.П., Федоров Ю.В. Вплив інфекційного процесу на морфофункціональну характеристику тканинних базофілів// Журн. мікробіол., Епідеміол. та імунол. – 1996. – № 1. – С. 107-108.

Красноженов Е.П., Федоров Ю.В. Influence of infectious process on morphofunctional characteristics

of tissue basophiles // Zhurn. mikrobiol., jepidemiol. i immunol. – 1996. – N 1. – P. 107-108. (in Ukrainian)

5. Лебедєва С.А., Трухачов А.Л., Іванова В.С., Арутюнов Ю.І. та ін Варіабельність збудника чуми та проблеми його діагностики / За ред. С.А. Лебедєвої. – Ростов-на-Дону: Антей, 2009. – 533 с.

Lebedeva S.A., Trukhachev A.L., Ivanova V.S., Arutyunov Yu.I. та ін. Diversity of plague infectious agent and problems of its diagnostics / Ed. by S.A. Лебедева. -Rostov-on-Don: Antei, 2009. - 533 p. (in Ukrainian)

6. Меньшиков В.В. та ін Лабораторні методи дослідження у клініці. - М: Медицина, 1987. - 365 с.

Menshikov V.V. та ін. Laboratory methods of research in clinic. - Москва: Medicina, 1987. - 365 p. (in Ukrainian)

Нормальна серозна рідина черевної порожнини прозора та світло-жовта, об'єм менше 50 мл. Якщо рідина в черевній порожнині накопичується у значній кількості, її називають асцитичною. Асцит - черевна водянка, водянка живота, значне скупчення вільної рідини (частіше транссудата) у черевній порожнині. Асцит може виникнути раптово (наприклад, при тромбозі ворітної вени) або поступово розвиватися, протягом декількох місяців, супроводжуючись метеоризмом, який спочатку може домінувати в клінічній картині. Іноді у порожнині очеревини накопичується від 8 до 30 л асцитичної рідини. При фізикальному обстеженні хворого асцит може бути розпізнаний за наявності у порожнині очеревини щонайменше 1 л рідини.

ОТРИМАННЯ І ОБРОБКА МАТЕРІАЛУ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОГО ДОСЛІДЖЕННЯ
Серозну рідину черевної порожнини одержують пункцією прямокишково-маткового поглиблення (дугласового простору, кишені) (кульдоцентез), за допомогою черезшкірної пункції (парацентез) або при лапароскопії.

Одночасно слід відібрати 5 мл венозної крові для визначення градієнта «сироватка-асцитична рідина» для альбуміну та інших біохімічних показників.

Цитологічне дослідження асцитичної рідини бажано провести одразу після доставки проби до лабораторії. При неможливості екстреного аналізу пробу необхідно зберігати в холодильнику не більше 12 годин з використанням гепарину або цитрату натрію як антикоагулянту.

КЛІНІКО-ДІАГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ ЗМІНИ ПОКАЗНИКІВ СЕРОЗНОЇ РІДИНИ У ЧЕРЕВНОЇ ПОРОЖНИНІ
Основними завданнями лабораторного аналізу асцитичної рідини є:
встановлення доброякісного чи злоякісного характеру випоту;
диференціювання неінфікованості/інфікованості рідини.

Асцит при портальній гіпертензії, гепатоцелюлярному раку та метастазах у печінку без поширення їх по очеревині є транссудатом.

Асцит при захворюваннях печінки, у випадках панкреатиту, перитонеального туберкульозу та при злоякісних пухлинах із метастазами по очеревині є, як правило, результатом ексудату.

Розроблено відповідні лабораторні критерії для диференціальної діагностики портального та злоякісного (метастази по очеревині) типів асциту. Основними лабораторними показниками поділу асциту на ексудат та транссудат за відсутності злоякісних клітин є вміст альбуміну, рівень холестерину та фібронектину. Для транссудату характерний високий градієнт альбуміну між сироваткою та асцитичною рідиною (>11 г/л), для ексудату, навпаки, в асцитичній рідині міститься велика кількість альбуміну та градієнт для альбуміну між асцитичною рідиною та сироваткою незначний (
У разі хілезної асцитичної рідини показано визначення в ній тригліцеридів та постановка електрофорезу ліпопротеїдів. Рівень раково-ембріонального антигену більше 2,5 мкг/л асцитичної рідини має високу клінічну специфічність та прогностичне значення, близьке до 100% для пухлини з метастазами по очеревині.

При дослідженні альбуміну проби сироватки та асцитичної рідини повинні бути взяті одночасно. Концентрація альбуміну в асцитичній рідині повинна бути визначена імунонефелометричним або імунотурбідиметричним методом. Фотометричне визначення альбуміну з бромкрезоловим зеленим дає завищені результати при концентрації альбуміну більше 7 г/л, тому даний методнепридатний визначення альбумінового градієнта. Рівень загального білка понад 30 г/л для діагностики транссудату має діагностичну специфічність 86% та діагностичну специфічність 83%.

Підрахунок та диференціювання клітин для визначення нейтрофільних гранулоцитів проводять в ЕДТА-асцитичній рідині. Якщо в пробі присутня кров, необхідно визначити:
відношення еритроцитів до лейкоцитів, щоб оцінити можливість кровотеч з шлунково-кишковий трактабо домішки «шляхової» крові;
вміст лейкоцитів (їхня висока відносна кількість вказує на запальний процес);
вміст нейтрофілів (асцит з переважанням і абсолютним вмістом нейтрофілів більше 250/мкл класифікується як інфекційний).

Якщо цитологічне дослідження неможливо провести протягом 12 годин, пробу можна зберігати в холодильнику до 2 діб, проте фіксувати матеріал додаванням 50% спирту у співвідношенні 1:1.
Визначення патогенної мікрофлори в асцитичній рідині проводять так само, як у крові - культивуванням в аеробних та анаеробних умовах.

ЗАГАЛЬНІ ВЛАСТИВОСТІ (МАКРОСКОПІЧНИЙ ВИГЛЯД РІДИНИ)
Асцитична (перитонеальна) рідина за своїм характером буває найчастіше серозною, рідше геморагічною, хілезною, слизовою оболонкою. Світла, прозора або з жовтуватим відтінком асцитична рідина частіше буває транссудатом. Мутна серозна рідина характерна для перитоніту, що виникає як ускладнення апендициту, панкреатиту, кишкової непрохідності, первинної бактеріальної інфекції. Зелений колір, забарвлення жовчю виникають при перфорації жовчного міхура, цибулини дванадцятипалої кишки, тонкої кишки, а також при холецистит, гострому панкреатиті. Зелений колір асцитична рідина набуває при концентрації білірубіну в ній понад 100 мкмоль/л. Якщо концентрація білірубіну в асцитичній рідині вище, ніж у сироватці, це свідчення перфорації жовчної протоки або міхура. Молочний вид серозної рідини (хілезний випіт) з'являється при великій кількості хіломікронів в асцитичній рідині. Це буває найчастіше при пошкодженні або обструкції грудної лімфатичної протоки, спричиненої туберкульозом, цирозом печінки, може зустрічатися при лейкозі (лімфомі). Можлива псевдохілезна інфузія при введенні хворим на великі обсяги кровозамінників.

Геморагічна серозна рідина черевної порожнини може з'явитися при абдомінальній травмі з розривом внутрішніх органів, зокрема під час розриву маткової трубипри позаматковій вагітності, а також при дисемінації злоякісної пухлинипо серозній оболонці. Яскравий колір рідина має при домішку «шляхової» крові під час проведення парацентезу. Бурий колір асцитична рідина набуває внаслідок кровотечі в черевну порожнину при туберкульозному перитоніті, метастазах у очеревину та після травматичних ушкоджень органів черевної порожнини. У інтегральної оцінкистан хворих з перитонітом застосовують Мангеймський перитонеальний індекс, при розрахунку якого одним з найбільш значущих показників є характер ексудату

БІОХІМІЧНІ ПОКАЗНИКИ
На концентрацію загального білка в асцитичній рідині в основному впливають такі фактори:
концентрація загального білка у сироватці крові, з яким рівень білка в асцитичній рідині має пряму залежність;
рівень портальної гіпертензії, з якою є зворотна залежність. Крім того, на концентрацію загального білка в асцитичній рідині впливає
прийом сечогінних препаратів.

Показаннями до визначення загального білка в асцитичній рідині є:
профілактичне призначення антибіотиків для запобігання бактеріальному перитоніту;
диференційна діагностикапервинного та вторинного (занесеного) бактеріального перитоніту;
асцит при серцевій недостатності

Загальний білок
При пороговому значенні вмісту загального білка в асцитичній рідині 25 г/л класичні уявлення про розподіл транссудату та ексудату на підставі випотівання білка підтверджуються лише на 56%, тобто практично не мають лабораторного підтвердження. Це з тим, що вміст загального білка низький при інфекційної етіології асциту, хоча ексудативна природа асциту безперечна. З іншого боку, вміст загального білка в асцитичній рідині високий у хворих із серцевою недостатністю, у яких асцитична рідина розглядається як транссудат.

Концентрація загального білка понад 30 г/л вказує на ексудат із клінічною чутливістю 93% та специфічністю 85%. Значення співвідношення білок більше °-5 вказує на ексудат із клінічною чутливістю 93%, специфічністю 85%. При асциті, викликаному злоякісними пухлинами, за винятком гепатоцелюлярного раку, концентрація загального білка становить 49-65 г/л, тоді як при цирозі печінки та гепатоцелюлярному раку - в діапазоні 17-21 г/л. Хворі з цирозом печінки та рівнем білка в асцитичній рідині менше 15 г/л мають поганий прогноз. Низький рівень білка в асцитичній рідині характерний для інфекційної природи асциту, в той же час при вторинній бактеріальній інфекції та туберкульозному перитоніті в асцитичній рідині постійно визначається рівень білка більше 30 г/л.

Альбумін
Альбуміновий градієнт між сироваткою та асцитичною рідиною визначається рівнем портальної гіпертензії. Пацієнти з альбуміновим градієнтом більше 11 г/л мають портальну гіпертензію, а при градієнті менше 11 г/л немає. При цирозі печінки з портальною гіпертензією альбуміновий градієнт понад 11 г/л має клінічну специфічність 97%. Асцити при змішаних типах – внаслідок цирозу печінки та метастазів по очеревині або цирозу печінки та туберкульозного перитоніту – також супроводжуються альбуміновим градієнтом понад 11 г/л.

Для відмінності транссудата ексудату альбуміновий градієнт має більше значення, ніж загальний білок. Слід мати на увазі, що при використанні сечогінних препаратів або парацентезі показники альбуміну та загального білка в асцитичній рідині змінюються.

У хворих з поширеним перитонітом ступінь зниження концентрації сироваткового альбуміну є високоінформативним прогностичним показником, що дозволяє оцінити тяжкість захворювання та ризик несприятливого результату. Зниження рівня альбуміну в крові відбувається як за рахунок підвищення катаболізму білків, властивого гострій фазі будь-якого запального процесу, і за рахунок ексудації в черевну порожнину. Перитонеальний ексудат містить значну кількість білка. Вважається, що в черевну порожнину може переміститися до 50% усієї позаклітинної рідини організму. З розвитком набряку спочатку процес всмоктування рідини очеревиною навіть прискорюється, проте потім через порушення мікроциркуляції він різко уповільнюється – відбувається накопичення ексудату. Якась кількість білка, у тому числі й альбуміну, що вийшов із кровоносного русла, втрачається для організму; випіт із високим вмістом білка веде до гіпоальбумінемії. Крім того, завжди виникає значний набряк перед- та заочеревинної клітковини та інших тканин через дію біологічно активних речовин: ферментів, кінінів, гістаміну, завдяки чому альбумін депонується у тканинах. Поряд із зменшенням синтезу (альбумін - негативний реактант гострої фази запалення) і збільшенням розпаду (переважання процесів катаболізму в організмі) вихід альбуміну в черевну порожнину і його депонування у набрякових тканинах є основною причиною прогностично несприятливого явища - зниження концентрації альбуміну.

Проникнення альбуміну з крові у випіт характеризується величиною загальної концентрації альбуміну у випоті. У більшості випадків загальної концентрації альбуміну у випоті знаходиться у тісному кореляційному зв'язку з величиною загальної концентрації альбуміну у випоті (концентрацією альбуміну у сироватці крові). У тих випадках, коли загальна концентрація альбуміну у випоті >34 г/л і загальна концентрація альбуміну у випоті значно нижча від загальної концентрації альбуміну у випоті, пацієнти мають легка течіяпісляопераційного періоду; результат захворювання сприятливий; відокремлюване по дренажах незначне.

У випадках значної відмінності стану альбуміну у випоті та сироватці величина загальної концентрації альбуміну у випоті не пов'язана з концентрацією альбуміну в крові; очевидно, має місце протеолітичний вплив на альбумін в ексудаті, що веде до його зміни та руйнування. В інших випадках абсолютна величина загальної концентрації альбуміну у випоті залежить від величини загальної концентрації альбуміну у випоті, а не від активності запального процесу в черевній порожнині. Для характеристики виразності запального процесу черевної порожнини підходить співвідношення загальної концентрації альбуміну у випоті, що характеризує ступінь проникності стінки судин для альбуміну. Параметр загальної концентрації альбуміну у випоті відображає тяжкість стану хворого, а параметр загальної концентрації альбуміну у випоті – вираженість запального процесу у черевній порожнині.

Ендотоксин
У хворих з каловим перитонітом (перфорацією товстої кишки) концентрація ендотоксину у перитонеальній рідині може досягати 1000 мкг/л. При дифузному бактеріальному перитоніті концентрація ендотоксину зазвичай відносно низька. Якщо в післяопераційний період у черевну порожнину продовжує надходити мікрофлора товстої кишки (підвищується ендотоксин у перитонеальній рідині), це дуже велика загроза розлитого перитоніту та загибелі пацієнта.

Глюкоза
При небактеріальному перитоніті величина співвідношення глюкозаасцнтичнарідина/ глюкозаплазма становить більше 1, при бактеріальному перитоніті ця величина менше 1. Концентрація глюкози в асцитичній рідині менше 2,8 ммоль/л характерна для бактеріального перитоніту. Найчастіше туберкульозного перитоніту концентрація глюкози в асцитичній рідині менше 1,7 ммоль/л. Вона також знижена при злоякісних пухлинах із метастазами, які є причинами асциту.

БАКТЕРІОЛОГІЧНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ
При інфікованості перитонеальної рідини монокультурою культуральні дослідження мають клінічну чутливість понад 85-90%, водночас такий показник, як вміст нейтрофілів/мкл понад 250 - лише 50%. Бактеріологічні дослідження показують, що у 70% випадків має місце грамнегативна мікрофлора, зазвичай Е. coli, у 20% випадків – грампозитивна.

Етіологічна значущість анаеробних мікроорганізмів доведена при всіх ускладнених інтраабдомінальних інфекціях, де вони є частиною полімікробних асоціацій. Clostridium perfringens та Clostridium septicum беруть участь у розвитку вторинного перитоніту, інтраабдомінального абсцесу та сепсису при перфорації товстої та термінальних відділів клубової кишки. При ускладненій пухлині товстої кишки у 70-85% хворих відмічено бактеріємію, зумовлену Clostridium septicum. При апендициті з випітної рідини виділяється Bilophila wadsworthia. У змішаних інфекціях часто беруть участь Peptococcus spp., Peptostreptococcus spp. Зустрічаючись у 90-95% випадків, Actinomyces spp., Prevotella spp., Lactobacillus spp., Fusobacterium spp. найбільш складні в діагностиці та терапії актиномікотичних абсцесів печінки. Провідне значення при інтраабдомінальних інфекціях мають бактероїди, насамперед Bacteroides fragilis та Bacteroides thetaiotaomicron. Частота виділення Bacteroides fragilis при вторинному перитоніті досягає 228-445%. Є дані про етіологічну значущість анаеробів при первинному перитоніті. У всіх пацієнтів з інфекціями жовчовивідних шляхів з ознаками жовчної гіпертензії або ендопротезами, що забезпечують прохідність загальної жовчної протоки, виділяються Clostridium perfringens та Bacteroides fragilis. При панкреатиті бактероїди та клостридії серед збудників виділяються у 5-14% випадків. При нозокоміальній інтраабдомінальній інфекції значущою є асоціація полірезистентних ентеробактерій, синьогнійної палички, ентерококів та анаеробів. Раневі інфекції у хворих після абдомінальних втручань у 3,9% викликані Bacteroides spp., у 1,1% – Clostridium perfringens. Розвиток перитоніту та летальність при інтраабдомінальній інфекції обумовлені грамнегативними аеробами, а формування інтраабдомінальних абсцесів у тих, хто вижив, – анаеробною мікрофлорою.

Прогресуючий мікробно-запальний процес у черевній порожнині (на фоні операційної травми, зниження резистентності організму тощо) протікає дуже бурхливо і протягом 4-5 діб може дійти до стадії, яка потребує хірургічного втручання. Динамічність процесу, висока ймовірність реінфікування, розвитку резистентності мікрофлори вимагають як емпіричного призначення антибактеріальної терапії одночасно з проведенням орієнтовного мікробіологічного експрес-аналізу (мікроскопія, газова хроматографія) та оцінкою чутливості мікроорганізмів у клінічному матеріалі з допомогою дисків осередку запалення. Рутинний бактеріологічний метод культивування дозволяє отримати результат через 24-72 години після початку дослідження, виявити характер патогенної мікрофлори, підтвердити правильність вибору антибактеріальної терапії або підказати необхідність її корекції. Постійний мікробіологічний моніторинг необхідний, тому що мікробіологічна ситуація в осередку інфікування може суттєво змінюватись у ході патологічного процесу та вимагати зміни терапії.

ДОСЛІДЖЕННЯ КЛІТИН КРОВІ
Еритроцити в ЕДТА-асцитичній рідині
У перитонеальній лаважній рідині міститься менше 25 000 еритроцитів/мкл. В асцитичній рідині еритроцити накопичуються після травм або є проявом туберкульозного або злоякісного ураження очеревини. Подібне співвідношення кількості еритроцитів та лейкоцитів в асцитичній рідині та крові вказує на ятрогенну поразку («шляхова» кров) або на кровотечу в черевну порожнину.

Лейкоцити
Визначення лейкоцитів у перитонеальної рідини можна проводити кількісно підрахунком у камері Горяєва чи напівкількісно - з допомогою діагностичних смужок з допомогою тест-зони визначення лейкоцитів. Чутливість тест-зони на лейкоцити становить 3000 клітин/мкл. Діагностична чутливість виявлення лейкоцитів методом «сухої хімії» у перитонеальній рідині становить 88%, специфічність – 94%.

Кількість лейкоцитів в асцитичній рідині, pH і концентрація лактату при інфікуванні асцитичної рідини суттєво відрізняються від значення цих показників при стерильному асциті, проте всі ці значення змінюються приблизно однотипно і не вдається розрізнити асцит при пухлинному та інфекційному перитоніті.

Відносний вміст нейтрофілів більше 25% популяції лейкоцитів асцитичної рідини розглядається як патологічний і характерний для бактеріального перитоніту. У хворих з цирозом печінки кількість лейкоцитів в асцитичній рідині обернено пропорційно обсягу рідини. Кількість лейкоцитів в асцитичній рідині підвищується при зменшенні об'єму асциту внаслідок лікування сечогінними препаратами, при цьому відносний вміст нейтрофілів у лейкоцитарній формулі не змінюється.

Якщо кількість лейкоцитів більше 500/мкл, особливо якщо гранулоцитів більше 250/мкл, то висока ймовірність первинного бактеріального перитоніту. У разі діагностична специфічність підтвердження цього діагнозу становить 93%, чутливість - 84%. При раку підшлункової залози та гепатоцелюлярному раку має місце помірний лейкоцитоз – 300-1000/мкл. При алкогольному цирозі кількість лейкоцитів в асцитичній рідині підвищується до 1100-21000/мкл.

Лімфоцитоз в асцитичній рідині – ознака тривалої застійної ексудації, хронічного запалення, туберкульозу або пухлинного процесу У хворих з цирозом печінки та аситичною хілезною рідиною відносний вміст лімфоцитів у ній становить від 12 до 96%, в середньому 70%.

Пухлинні маркери
Вуглеводний антиген 19-9
В асцитичній рідині при пороговому значенні (дискримінантному рівні) 30 ОД/мл діагностична чутливість злоякісної пухлини становить 52%, діагностична специфічність – 100%.

Раково-ембріональний антиген
Дослідження раково-ембріонального антигену в асцитичній рідині дозволяє диференціювати доброякісні та злоякісні захворювання з діагностичною специфічністю та чутливістю 83%. При пороговому значенні раково-ембріонального антигену 2,5 мкг/мл діагностична чутливість становить 45%, діагностична специфічність – 100%. Якщо визначення раково-ембріонального антигену в асцитичній рідині поєднується з дослідженням на наявність пухлинних клітин, діагностична чутливість у разі злоякісної пухлини підвищується до 80%. Слід зазначити, що дослідження раково-ембріонального антигену в асцитичній рідині малозначуще для діагностики дифузної злоякісної мезотеліоми: раково-ембріональний антиген визначається лише у 1-9% випадків цієї патології. У той самий час раково-эмбриональный антиген визначається 80% спостережень асциту, що з пухлинним ураженням при раку шлунка, молочної залози, легкого.

ЦИТОЛОГІЧНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ
Найвища аналітична чутливість досягається при цитологічному дослідженніпрепаратів, забарвлених за Паппенгеймом і Лейшманом, та за необхідності при додатковому цитохімічному дослідженні. Діагностична чутливість виявлення пухлинних клітин під світловим мікроскопом становить 40-70%. Якщо є можливість отримати клітини з 200 мл і більше асцитичної рідини, діагностична чутливість підвищується до 70-90% при практично 100% діагностичної специфічності. Іноді лабораторне виявлення пухлинних клітин в асцитичній рідині передує клінічній маніфестації пухлини на 3 роки та більше.

У жінок пухлинні клітини в асцитичній рідині в порядку зменшення часто виявляють при пухлинах генітального тракту, особливо яєчників, потім раку молочної залози і шлунково-кишкового тракту. У чоловіків найчастіше визначається дисемінація по очеревині при пухлинах шлунково-кишкового тракту, лейкозах. Приблизно у 80% випадків пухлина відноситься до аденокарциноми. З патологічних процесів, які характерні для ураження очеревини і практично не зустрічаються в плеврі та перикарді, слід зазначити псевдоміксом очеревини.

Поразка очеревини спостерігається при слизопродукуючої пухлини, найчастіше прикордонної муцинозної пухлини яєчника або мукоцеле апендикса, а також при високодиференційованій муцинозній аденокарциномі яєчника або апендикса. Вважається, що ураження може розвинутися при розриві кістозної пухлини та генералізованої дисемінації пухлинних клітин черевної порожнини. При цьому в черевній порожнині накопичується велика кількість слизу, який важко аспірувати через його високу щільність. Мазки з аспірату при псевдоміксомі очеревини містять велику кількість позитивного слизу, резистентного до гіалуронідази. Пухлинних клітин, як правило, небагато чи їх не виявляють у кількох препаратах, тому для встановлення діагнозу нерідко доводиться переглянути кілька мазків або виконати повторну пункцію.

Для встановлення доброякісного чи злоякісного характеру ураження слід бути дуже уважними. При доброякісному ураженні клітини невеликих розмірів, з дрібними темними ядрами, помірною цитоплазмою, в цитоплазмі містяться вакуолі. У слизу нерідко містяться тяжі із фіброцитів. Не можна робити висновок про злоякісний процес тільки на підставі виявлення великої кількості слизу, оскільки він може бути результатом розриву мукоцеле апендикса або доброякісної муцинозної цистаденоми яєчника. Особливу обережність слід виявляти у тих випадках, коли слиз із доброякісної пухлини поєднується з групами з мезотеліальних клітин з реактивними змінами. Для встановлення характеру поразки слід уважно вивчити слизопродукуючі клітини щодо наявності чи відсутності ознак злоякісності.

Перитонеальна рідинау нормі забезпечує рівномірне змащування поверхні органів черевної порожнини та зменшує тертя між ними. Вони прозорі і абсолютно стерильні - в ній немає бактерій. Кількість мінімально – 5-20 мл. Складається з води, мінімальної кількості та мікроелементів.

Утворюється перитонеальна рідина при фільтрації крові і повертається назад через лімфу. Баланс утворення та зворотного всмоктування перитонеальної рідини утримує її постійну кількість у черевній порожнині.

Різні захворювання призводять до збільшення обсягу перитонеальної рідини, у такому разі вона називається асцитичної.

Асцитична рідина -показник патології, нездатності утримувати рівновагу між утворенням та зворотним всмоктуванням перитонеальної рідини.

Перитонеальна рідина в нормі

• кількість – до 50 мл
• колір - від прозорого до блідо-жовтого
• і - нормальні показникизалежать від рівнів у крові
• - такий самий рівень як і в крові
• клітини – у незначній кількості

Аналіз асцитичної рідини – це

кілька видів досліджень спрямованих на діагностику причин асциту – надмірного накопичення рідини в черевній порожнині.

Процедура взяття асцитичної рідини для аналізу називається парацентез.

Причини появи асциту

• підвищений тиск у судинах печінки – цироз печінки, хронічна серцева недостатність.
• запалення очеревини внаслідок її пошкодження – інфекцією, пухлинами (рак шлунка, рак кишечника, первинний рак очеревини, лімфома), панкреатит, аутоімунні хвороби

Характер асцитичної рідини вкаже на вигляд патологічного процесу та допоможе у виборі кращого методулікування.

Види аналізів перитонеальної та асцитичної рідини

• зовнішня оцінка асцитичної рідини - кількість, колір, запах
• біохімічний аналіз - ЛДГ, загальний білок, розрахунок градієнта альбуміну, глюкоза,
• мікроскопія осаду – для виявлення аномальних пухлинних клітин
• забарвлення осаду методом Грама - дозволяє у мікроскопі побачити бактерії
• бакпосів на живильні середовища з визначенням чутливості до антибіотиків

Види асцитичної рідини

• транссудати
• ексудат

Транссудат

Транссудатз'являється при підвищеному тиску в судинах печінки та просочуванні рідини в простір очеревини, а також низьким рівнембілка альбуміну в крові, який у нормі утримує воду всередині судин.

Транссудат буває при хронічній серцевій недостатності, нефротичному синдромі, цирозі печінки.

Властивості транссудату

• асцитична рідина прозора або слабо-солом'яного кольору
• загальний білок – менше 3г/дл
• альбумін - знижений, градієнт понад 1,1 г/дл
• ЛДГ градієнт кров/асцитична рідина – менше 0,6
• глюкоза - дорівнює рівню в крові
• мікроскопія осаду – незначна кількість лімфоцитів
• питома вага - менше 1,015

Ексудат

Ексудативна асцитична рідина- результат ушкодження очеревини бактеріями, злоякісними новоутвореннями, ферментами (наприклад, підшлункової залози), розривом органів черевної порожнини (жовчного міхура при жовчнокам'яній хворобі або кісті підшлункової залози).

Властивості

• колір - від жовтого до зеленого
• загальний білок в асцитичній рідині понад 3 г/дл
• альбумін підвищений, градієнт менше 1,1 г/дл
• ЛДГ градієнт понад 0,6
• глюкоза – нижче 3,3 ммоль/л
• підвищена кількість лейкоцитів, головним чином осаді
• питома вага - 1,015

Перитонеальна рідина в нормі та при захворюваннях

Зовнішні параметри

• в нормі перитонеальна рідина прозора, злегка жовтуватого відтінку.
• жовтий колір – при патології печінки з підвищеним рівнем білірубіну.
• молочний колір - закупорка лімфатичних судин
• зелений - наявність жовчі, що прямо вказує на розрив жовчовивідних шляхів
• при попаданні крові асцитична рідина стає червоною, що буває при травмі та пухлинах.
• каламутність - при розмноженні бактерій у черевній порожнині

Біохімічний аналіз асцитичної рідини

• в нормі глюкоза в асцитичній рідині дорівнює рівню в крові
• амілазу досліджують лише при підозрі на запалення підшлункової залози (парктератит)
• пухлинні маркери - для визначення виду та можливої ​​первинної локалізації пухлини
• ЛДГ – показник розпаду клітин

Мікроскопія осаду

Мікроскопію осаду асцитичної рідини роблять за підозри на інфекцію чи новоутворення. У нормальних умовах осад дуже мізерний, у ньому знаходять одиничні лейкоцити (переважно лімфоцити), немає і бактерій.

• нейтрофіли (підвид лейкоцитів) підвищені при бактеріальному ураженні очеревини, а лімфоцитів – при туберкульозі очеревини
• аномальні клітини (неправильної форми, великого розміру та нетипового забарвлення) зустрічаються при поширенні пухлини по очеревині

Аналізи на інфекції

• фарбування за Грамом - осад наносять на предметне скло і фарбують за Грамом, що дозволяє виявити бактерії та грибки.
• бакпосів на живильні середовища з вирощуванням культури протягом декількох днів та визначенням її чутливості до антибіотиків
• аденозин деаміназа – білок, значно підвищена при туберкульозі очеревини

Аналіз перитонеальної та асцитичної рідини - норма та зміни при захворюваннях was last modified: Грудень 6th, 2017 by Марія Бодян